Popularni Postovi

Izbor Urednika - 2020

DNA fragmentacija sperme: cijena i koristi testa

Pin
Send
Share
Send

Test za fragmentaciju DNK spermatozoidima metodom TUNEL - test za otkrivanje oštećenja DNK u spermatozoidima. Analiza pomaže u procjeni funkcije plodnosti i identifikaciji uzroka neplodnosti i spontanih pobačaja.

Studija se provodi samo u kombinaciji sa studijom ejakulata * (usluga 36.100 Spermograma).

* Ako je spermogram izveden prije 2 dana, možete uzeti TUNEL bez ponovnog pregleda ejakulata (servis 36.100 Spermograma). Budite sigurni da ste dobili rezultat sperme u laboratoriji.

Indikacije

  • neplodnost nejasne geneze sa normalnim spermogramima,
  • supružnik koji ne razvija trudnoću,
  • neuspješni pokušaji korištenja asistiranih reproduktivnih tehnologija (IVF, ICSI, IMSI) u povijesti,
  • kasna očinska dob
Priprema
Spermogram prolazi nakon seksualne apstinencije. Preporučeni period apstinencije je 2-7 dana. Tokom perioda pripreme nije dozvoljeno piti alkohol u bilo kojoj količini.

Za 7-10 dana potrebno je isključiti lijekove, postupke s pregrijavanjem (UHF, sauna, kupka).

Na dan koji je prethodio analizi, poželjno je isključiti težak fizički i psihički stres.

Nakon masaže, prostata bi trebala trajati najmanje 3 dana.

Ako su u pripremnom periodu postojale prehlade ili druge akutne bolesti praćene porastom temperature, trebalo bi da odbijete provođenje studije.

Uslovi hvatanja
Ejakulat se sakuplja masturbacijom u sterilnoj plastičnoj posudi. Korištenje kondoma nije dozvoljeno.

Da bi se dobili ispravni rezultati istraživanja, potrebno je prikupiti sav dobiveni materijal.

Referentne vrijednosti: sadržaj spermatozoida sa prekidima DNK nije veći od 15%.

Uzroci patoloških promjena:

  • kongenitalni (genetski određeni) poremećaji spermatogeneze (nedostatak protamina),
  • izlaganje štetnim faktorima (različite vrste zračenja, uzimanje određenih lijekova, sustavno uzimanje alkohola, trovanje olovom, trovanje živom),
  • hronične upalne bolesti reproduktivnih organa (prostatitis, vesiculitis),
  • varikocela,

Etiologija oštećenja DNK

Fiziološki mehanizam fragmentacije (razgradnje strukture) DNK nije u potpunosti shvaćen. Mogući uzroci nedostataka u ključnoj komponenti muške gamete su:

  • apoptoza,
  • kvarovi u remodeliranju kromatina,
  • oksidativni stres.
  • Brojni spoljni faktori mogu izazvati intracelularne poremećaje:

    1. Infekcije genitalnog trakta. Infekcija muških reproduktivnih organa patogenim bakterijama dovodi do upale i uzrokuje povećanu proizvodnju belih krvnih zrnaca. Ovaj proces je praćen oksidacijom DNK ćelija koje narušavaju njihov integritet.
    2. Nedostatak regularnih ejakulacija. Postoji uobičajena zabluda da ako “spasite seme” i da ne ejakulirate, onda će biti više sperme, što će povećati šanse za oplodnju. Ovo definitivno nije slučaj. Uz ograničenu ejakulaciju, sperma će se duže izlagati oksidativnom stresu i, kao rezultat, imati veću količinu oštećenja DNK. Bolje je ejakulirati svakih 2-3 dana kako bi se sačuvala DNK sekvenca.
    3. Pregrijavanje. Nije bez razloga testisi smješteni na vanjskoj strani tijela: visoka temperatura ne doprinosi optimalnoj proizvodnji sperme. . Neželjena hipertermija može biti uzrokovana neudobnim držanjem, zbijenom odjećom, nekim profesionalnim aktivnostima (pečenje, plinsko zavarivanje, avtovozdenie), topli spa tretmani, navika držanja laptopa u krilu. Povećana temperatura testisa je uočena kod nekih oboljenja (nespušteni testis, varikocela).
    4. Caffeinomania. Istraživanja su pokazala da dnevna konzumacija do 300 mg kofeina (3 ili više šoljica kafe) puna je oštećenja integriteta DNK sperme. Kako se ispostavilo, kofein je snažan inhibitor procesa reparacije DNK.
    5. Upotreba droga i neki lijekovi. Dokazana veza muške neplodnosti sa upotrebom marihuane, kokaina, metamfetamina, opioida, anaboličkih steroida. Čak i kratkotrajna upotreba ovih supstanci može dovesti do smanjenja kvaliteta sperme i libida. Hronična upotreba droge povećava šanse oštećenja sperme na molekularnom nivou. U slučaju ovisnosti o kokainu, rezidualni efekti se mogu uočiti u roku od dvije godine od posljednje upotrebe. Značajna opasnost za spermatogenezu su lijekovi koji se koriste u kemoterapiji, u liječenju hipertenzije, gihta, povećane kiselosti želuca, upale urinarnog trakta. Grupa lekova štetnih za mušku plodnost uključuje neke vrste antibiotika, antikonvulzive, lekove koji zadržavaju tečnost i metadon.
    6. Zloupotreba duvana i alkohola. Iako su neke studije pokazale da neke vrste pića koje sadrže alkohol (na primjer, crno vino) imaju antioksidativni učinak, također je dokazano da konzumacija dva ili više čaša alkohola dnevno negativno utiče na genetski materijal sperme. Ništa manje destruktivan za DNK muških gameta nikotina.
    7. Iracionalne dijete. Redovito vježbanje treba da pomogne održavanju zdrave fizičke forme, a ne da oslabi ograničenja u ishrani. Normalna geneza sperme treba adekvatno dopunjavanje nutrijenata.
    8. Ekološki zagađivači. Ekološki uticaj toksičnih supstanci kao što su dioksin, pesticidi, herbicidi, uzrokuje oštećenje DNK spermatozoida. Profesionalna izloženost metalima, bojama, rastvaračima, sredstvima za odmašćivanje, lepkovima na bazi vode takođe može da dovede do smanjenja kvaliteta DNK.
    9. Starost Analize spermija pacijenata nakon 40 godina ukazuju na trend povećanja fragmentacije DNK, kao i na povećanje genetskih mutacija i kromosomskih abnormalnosti.
    10. Elektromagnetno zračenje. Upotreba elektronskih naprava u svakodnevnom životu, posebno u mobilnim telefonima, ozbiljna je prijetnja reproduktivnom sistemu muškaraca.

    Većina ovih faktora rizika doprinosi intenzivnoj oksidaciji muških gameta. To dovodi do oksidativnog stresa - stanje kada nivo zaštitnog potencijala ćelija nije dovoljan da izdrži štetne slobodne radikale.

    Posljedice defekata u genetskoj komponenti

    Prekidi u DNK lancima sperme ispunjeni su ozbiljnim prijetnjama plodnosti:

  • kršenje procesa oplodnje,
  • usporavanje razvoja blastociste,
  • pogoršanje implantacije embriona,
  • česti pobačaj.
  • Ponekad ženska jaja pokazuju sposobnost vraćanja sperme sa fragmentiranim DNK. Međutim, takva "rekonstrukcija" je nemoguća sa širokom slikom fragmentacije ili oocita lošeg kvaliteta.

    Spermatološko ispitivanje na molekularnom nivou

    Razvoj mikrobiologije i genomike omogućio je razvoj brojnih metoda za proučavanje molekularnog stanja muških gameta. Svaki laboratorijski test za fragmentaciju DNK sperme (od slijedećih) našao je široku primjenu u andrologiji i reprodukciji:

    1. TUNEL - proučavanje sperme pod mikroskopom pomoću svetlosno-optičkog efekta. Markirani nukleotidi se dodaju uzorku sperme. Oni nepogrešivo identifikuju mesta lomljenja DNK i udubljuju se u njih, zbog čega se izmenjene ćelije nađu sjajne. Njihov sadržaj u ejakulatu određuje se brojanjem i izražava se u procentima.
    2. SCD - analiza dekondenzacije (otpuštanja) kromatina u staničnim jezgrama. Unutar zdrave ćelije, ova supstanca je bliže centru nukleusa i dalje u oštećenoj ćeliji. Enzimi se koriste kao definirajući marker. Zahvaljujući njima, glave sperme sa DNK razbijaju se "osvetljavaju", time vizualizujući sliku oštećenja.
    3. SCSA je proučavanje strukture hromatina pomoću fluorescentnog DNA markera. Spermatozoidi obojeni njime prolaze kroz laserski snop, koji uzrokuje da stanice sijaju u različitim bojama, u zavisnosti od stepena oštećenja DNK: zelene - normalne, žute - umjerene greške, crvene - kritične promjene.

    Rezultat genetičke analize sperme poznat je kao indeks fragmentacije DNK sperme. Njegova granična vrednost kod zdravog muškarca je 15-20%.

    Pokazujući nivo spermatozoida sa fragmentiranim DNK, molekularni testovi omogućavaju objektivnu procenu pacijentovog potencijala za plodnost:

  • ≤ 15% - prisustvo manjeg problema
  • > 16% ≤ 49% - povećana opasnost od subfertilnosti,
  • > 50% - visok rizik od neplodnosti.
  • Indikacije za DNK test

    Visokotehnološka genetička analiza gameta je koristan izvor informacija za neke muške patologije: nasljedne (cistične fibroze) ili stečene (varikokele). Međutim, DNK test se uglavnom propisuje tokom niza neuspjeha u liječenju neplodnosti:

  • spor razvoj blastociste ili embriona,
  • nekoliko neuspješnih pokušaja IVF / ICSI
  • ponavljajućih pobačaja sa partnericom
  • idiopatska neplodnost.
  • Kao što praksa pokazuje, među kandidatima za DNK testiranje najčešće su muškarci:

  • starost
  • sa nezadovoljavajućim parametrima sperme (koji često koreliraju sa fragmentacijom DNA),
  • redovno izloženi štetnim supstancama.
  • Načini za podešavanje fragmentacije DNK

    U zavisnosti od toga šta je uzrokovalo diskontinuitet lanaca DNK, biraju se metode za obnavljanje njihovog integriteta. Terapijski kurs se razvija individualno za svakog pacijenta.

    Moguće opcije tretmana:

  • antibiotska terapija - kada se otkrije infekcija,
  • promena načina života: izbegavanje zavisnosti (droga, pušenje, alkohol, kofein), promena zanimanja,
  • dijetalna terapija - uključivanje u ishranu svježih namirnica, posebno onih koje sadrže antioksidante i vitamine C i E,
  • operacija varikocela,
  • aspiracija sperme testisa za začeće in vitro (za razliku od oštećenja DNK u ejakulatu, sadržaj testisa ne može biti pod uticajem fiziološke patologije),
  • antioksidantna terapija.
  • S obzirom na to da se reprodukcija nove sperme odvija periodično (jednom u četvrtini), moguće je procijeniti učinkovitost terapijskog kursa samo 3 mjeseca nakon početka liječenja.

    Zaključak

    Očevski doprinos oplodnji, razvoju embrija i nastanku zdravog potomstva je od fundamentalnog značaja. Stoga, da bi se sprovela funkcija plodnosti, nekim pacijentima se preporučuje da se podvrgnu ispitivanju sperme na nivou DNK.

    Molekularno testiranje može pružiti vrijedne informacije o statusu gameta čovjeka. Glavna stvar je da se ovom važnom dijagnostičkom alatu i naknadnom tretmanu poveri profesionalni lekar.

    Indikacije za analizu

    Da bi se identifikovao prekid lanca DNK sperme, sprovodi se poseban test. Spermogram u ovom slučaju nije informativan. Prikazuje samo koncentraciju spermatozoida u ejakulatu, njihovu aktivnost. Prikazan je test fragmentacije:

    • sa muškom neplodnošću, ako nema drugih faktora koji je provociraju,
    • ako pokušaji umjetne oplodnje nisu uspjeli,
    • ponavljajući pobačaj
    • ako je embrion lošeg kvaliteta,
    • muškarci u dobi od 45 godina,
    • nakon krioprezervacije uzorka sperme prije IVF (in vitro oplodnja),
    • sa proširenim venama spermatnog vrpce,
    • ako je u roku od tri mjeseca došlo do povišene tjelesne temperature.

    Takođe, procedura mora biti podvrgnuta muškarcima koji rade u uslovima visokih opasnosti.

    Kako se vrši analiza?

    Za provjeru integriteta DNK sperme provodi se tunel-test, koji uključuje mikroskopsko ispitivanje sperme. Pacijent mora uzeti uzorak sperme u posebnu sterilnu posudu sa poklopcem. Važno je! Kondom nije pogodan za ovu svrhu, jer komponente koje sadrži može negativno uticati na pokretljivost sperme. Takođe, prilikom transporta kontejnera sa genetskim materijalom, potrebno je posmatrati temperaturni režim, koji je temperaturni opseg od +27 do +37 stepeni Celzijusa.

    Da bi se dobio tačan rezultat, analiza se mora obaviti u roku od jednog sata od uzimanja uzorka. Za to, tehničar dodaje reagens ejakulatu. On, reagujući sa sjemenom tekućinom, puni lomove DNA fluorescentnim nukleotidom, čineći fragmentirane spermatozoide vidljivima. Laboratorijski pomoćnik provodi njihovu kalkulaciju, koja je naznačena kao postotak.

    Da bi se dobila kompletna slika, paralelno se izvode elektronsko mikroskopsko ispitivanje i spermogram.

    TUNEL test priprema

    Da bi test bio što precizniji, potrebno je uzeti 2-7 dana prije uzimanja uzorka: suzdržati se od seksualnog odnosa, uzimati lijekove, posjetiti kupke. Važno je pratiti dijetu, izbjegavati alkohol, ne pušiti. Prije prikupljanja sperme, urea se mora isprazniti.

    Prilikom ponavljanja analize, preporučuje se da se posmatra redoslijed i trajanje pripremnih aktivnosti, jer to može uticati na rezultat.

    Dešifrovanje

    Nakon analize, rezultat se daje s testnim indeksom i snimkom na kojem se bilježe fragmentirani spermatozoidi. Indeks je odnos između oštećenog i zdravog genetskog materijala koji se može oploditi. Normalno, indikator ne bi trebao biti veći od 15%. To sugeriše da je sperma sa slomljenim lancem DNK manje zdrava, stoga je reproduktivno zdravlje muškarca u redu i postoji velika verovatnoća prirodnog začeća.

    Kada je indeks iznad 15%, ali ispod 30%, mogućnost oplodnje jaja prirodno ostaje, ali to može potrajati dugo.

    Ako je broj oštećenih spermatozoida u ejakulatu 30-50%, stručnjaci vjeruju da je trudnoća prirodno malo vjerovatna, stoga se preporučuje IVF (in-vitro oplodnja), intrauterina inseminacija (tehnika reprodukcije, koja uključuje uvođenje zdravih, unaprijed odabranih spermija u cervikalni kanal). ICSI. Dakle, s indeksom od preko 30%, doktori plodnosti preporučuju IVF. Ako je fragmentirani genetski materijal 50% ili više, in vitro oplodnja je neefikasna. Preporučuje se primena intracitoplazmatske injekcije sperme (ICSI). Sa indeksom od 60% ili više, šanse za uspešnu oplodnju su minimalne. ICSI se izvodi, ili se uzima donorska sperma.

    Do nedavno nije bilo moguće identificirati oštećene spermatozoide, a kamoli liječiti. Danas je ovaj problem moguće tretirati. Uvođenje inovativnih medicinskih tehnika omogućava uspješno vraćanje fragmentirane DNK sperme.

    Da bi se to postiglo, neophodno je eliminisati ili ograničiti uticaj faktora koji izazivaju mušku neplodnost: prekomernu težinu, štetne navike (pušenje, alkohol), izlaganje toksičnim, hemijskim supstancama (rad u opasnim industrijama). Druga faza je sveobuhvatna dijagnoza, eliminacija različitih upalnih procesa u organizmu, uključujući i bolesti muškog reproduktivnog sistema. Paralelno sa tretmanom antibakterijskim, anti-inflamatornim lekovima (ako je potrebno). Vitaminski kompleksi, antioksidanti su obavezni da vrate zdravlje muškaraca i promovišu formiranje zdrave sperme.

    Trajanje tretmana može biti 3-6 mjeseci. Ponekad vam treba više. Ako je terapija bila neefikasna, a broj zdravih spermatozoida ne prelazi 20-30%, lekari nude paru uslugu ICSI. Dakle, stručnjaci za reprodukciju veštački biraju zdrav, oplođiv genetski materijal iz ejakulata. Onda je posađena u jaje žene.

    U slučaju velikog broja sperme sa fragmentiranim DNK, izvodi se i operacija da bi se izvukli direktno iz testisa. To je zbog činjenice da tokom ejakulacije povećava se postotak oštećenih stanica.

    Trošak analize za fragmentaciju DNA:

    Oštećenje DNK sperme povezano je sa parametrima sperme: smanjenjem koncentracije, pokretljivosti i proporcije normalnih ćelija sperme. U isto vrijeme, u 10-20% slučajeva, mogu se pojaviti sa “normozoospermijom”.

    Glavni uzrok oštećenja DNK je oksidativni stres spermeuzrokovane prekomjernom proizvodnjom reaktivnih kisikovih vrsta (vidi sliku Aitken RJ et al., 2014).

    Drugi razlog je nepotpuna apoptoza spermatozoida, povezana sa smanjenom spermatogenezom i spermatogenezom, i / ili eliminacijom defektnih oblika kod epididimisa.

    ByAitken RJ et al. // Azijski J Androl.2014, 16 (1): 31.

    Oštećenje DNK sperme je multifaktorski proces koji zavisi i od genetske predispozicije i od spoljašnjih štetnih faktora (pušenje, pregrevanje, toksične supstance, itd.).

    Budući da to može imati više uzroka, procjena fragmentacije, oksidativnog stresa i kondenzacijskih poremećaja kromatina (pakiranje) se posebno preporučuje za:

    parovi sa pobačajima,

    parovi s neobjašnjivom neplodnošću duže od 6 mjeseci,

    muškarci stariji od 40 godina

    pacijenti sa varikokele,

    пациентов с системными заболеваниями (диабет, ожирение и др.),

    мужчин с вредными факторами образа жизни (курение, ионизирующее излучение, токсические вещества, перегревание, в т.ч. при использовании облегающей одежды, несбалансированное питание и др.),

    мужчин с историей рака и химиотерапией,

    мужчин, проходящих лечение некоторыми рецептурными препаратами,

    у мужчин, перенесших урогенитальные инфекции,

    плохом качестве эмбриона во время повторных циклов донорства яйцеклеток,

    мужском идиопатическом бесплодии.

    Для обнаружений повреждений ДНК в сперматозоидах используют различные методы: дисперсии хроматина в агарозном геле (SCD), электрофореза ДНК после денатурации (COMET), терминальной метки (TUNEL) и др.

    U tabeli smo sumirali principe i interpretacije najčešće korišćenih testova.

    Dimenzije rezultata

    Metoda TdT-posredovana oznaka dUTP-kraj rupture DNK lanca (TUNEL metoda)

    Meri stepen oštećenja DNK umetanjem DNK sonde (modifikovanog nukleotida) u mesto oštećenja DNK.

    Proporcija spermatozoida sa oštećenjem DNK, koji su modifikovani nukleotidi, ugrađena je u DNA jaz

    Analiza strukture kromatina sperme (SCSA metoda)

    Mjerenje osjetljivosti DNA na denaturaciju

    Broj sperme sa fragmentiranim DNK u%

    Analiza disperzije kromatina sperme (SCD metoda)

    Mjerenje osjetljivosti DNA na denaturaciju

    Broj sperme sa fragmentiranim DNK,%

    Analiza DNK kometa (COMET)

    Mjerenje osjetljivosti DNA na denaturaciju

    Stepen fragmentacije DNK u jednoj spermiji procenjuje se procentom DNK u repu komete, dužini repa i intenzitetu boje.

    Bojenje anilin plavom i hromomicinom A3

    Merenje nivoa zbijanja hromatina spermatozoida na osnovu odnosa histon-protamin

    Broj spermatozoida s niskim zbijanjem kromatina,%

    Indeks G0 + G1 + G2x2 manji od 40

    Povijesno gledano, prije više od 35 godina, korištena je SCSA metoda za procjenu fragmentacije DNA. Za naučne svrhe, najčešće se koristi TUNEL, koji može detektovati i jednolančane prekide i dvostruke lomove DNK. Najsavremeniji i najpogodniji za kliničku upotrebu je SCD metoda, neki smatraju da je ona i najosetljivija.

    Kondenzacija (pakovanje) kromatina spermatozoida procjenjuje se odnosom histonskih i protaminskih proteina u spermatozoidima, za koje se koristi bojanje anilin plavom i kromomicinom A3.

    Originalne fotografije iz naše laboratorije:

    A- TUNEL, B-SCD, B-histoni / Protamini

    Detekcija povećane fragmentacije DNK spermatozoida zahteva tretman koji ima za cilj eliminaciju sumnjivog patogenetskog faktora: infektivnih upalnih procesa, pa čak i asimptomatskog prenosa infekcija kao što su Chlamydia trachomatis, Mycoplasma sp., Ureaplasmaurealyticum, neki serotipovi E. coli, itd. uključujući i varikokele), pušenje, djelovanje određenih lijekova (paroksetin, miloksan, pentoksifilin, itd.), prekomjerna težina, metabolizam ugljikohidrata, itd. U slučaju otkrivanja oksidativnog stresa - dodatak nema koristi od različitih hranjivih tvari, antioksidansi. U najtežim slučajevima može biti korisno dobiti spermije direktno iz testisa, gdje su zaštićene od djelovanja aktivnih radikala. hemato-testikularna barijera. Ali u ovom slučaju, kasniji neuspjesi IVF ICSI-ja mogu biti povezani s kršenjem pakiranja kromatina, jer se zamjena histona protaminima neophodnim za potpuno sazrijevanje spermatozoida javlja već kod epididimisa.

    U poslednjih nekoliko godina, moderne ćelijske tehnologije se koriste prilično efikasno da bi se normalizovala struktura hromatina sperme, uključujući povezano sa upotrebom MSC i Sertoli ćelija.

    Dr. med. Nauke, profesor V.A. Bozhedomov

    Nekoliko citata o značaju fragmentacije DNK sperme:

    “… U spermatozoidima kod muškaraca s oligozoospermijom, povećava se oštećenje DNK. Ovo povećanje je povezano sa smanjenjem šanse za prirodnu trudnoću i povećanjem vjerovatnoće ranog gubitka trudnoće ... "

    Muška neplodnost / A. Jungwirth (predsjedavajući) i sur. ©

    Evropska asocijacija za urologiju, 2017: 14.

    „... Postoje dva tipa fragmentacije DNK sperme, od kojih jedan zavisi od parametara spermograma, a drugi ne. "

    Muratori M. i dr. / Hum. Reprod., 2008, V23 (5), str.

    “... Neispravan spermatozoid koji sadrži oštećenu DNK, zadržava sposobnost oplodnje. Međutim, neki fenotipovi neplodnosti su povezani sa takvim oštećenjem DNK, na primjer, neobjašnjivom i idiopatskom neplodnošću, ponovljenim neuspješnim VMI i IVF-om i uobičajenim pobačajima. Štaviše, veći rizik od raka i defekata prenosa u potomstvu je povezan sa oštećenjem DNK sperme ... "

    A. Zini, A. Agarwal (ur.), 2011, Springer, 512. Sperm kromatin: biološka i klinička primjena kod muške neplodnosti i asistirane reprodukcije.

    "... Od mnogih razloga za koje se trenutno misli da uzrokuju disfunkciju spermatozoida, oštećenje nuklearne DNK je najviše proučavano i sve više prepoznato kao ključni faktor koji utiče na kvalitet embriona, njegov razvoj i implantaciju ..."

    Mallidis C. et al. // Hum Reprod., 2010, V.26, N7, P.1641-1649

    „... Spermatozoidi sa fragmentiranom DNK mogu oploditi zrele oocite, ali aktivacija genoma očeva može poremetiti embrionalni razvoj, što dovodi do preimplantacijskih i postimplantacijskih gubitaka. Ovaj tip oštećenja može se pojaviti kod embriona sa normalnim kromosomskim komplementom i može objasniti zašto neki normalni kariotipni embriji nisu u stanju da obezbede trudnoću kod pacijenata sa neobjašnjivim pobačajima. Uopšteno, što se stepen oštećenja DNK prenosi na embrion paternalnim genomom, to će se brže manifestovati tokom razvoja embriona ... "

    Bareh Gihan M. i sur. // Fertility and Sterility, 2016, 105 (2): 15-282

    “... Nedavne studije su pokazale važnost integriteta DNK sperme kao važnog faktora koji utiče na funkcionalnu kompetenciju sperme. Stoga, detekcija fragmentacije DNK sperme može biti klinički korisna kao dio procesa procjene plodnosti ... Testovi fragmentacije DNK sperme praktično nemaju razliku u predviđenoj vrijednosti između IVF i ICSI ... "

    Cissen M et al. Mjerenje fragmentacije DNK sperme i kliničkih ishoda: Sistematski pregled i Meta-analiza. PLoS One. 2016 Nov 10, 11 (11): e0165125.

    „... Postojeći životinjski modeli i podaci o ekstrapolaciji u ljudskim istraživanjima izazivaju zabrinutost zbog zdravstvenih problema kod potomstva dobivenih iz sperme sa povećanim nivoom fragmentacije DNK. "

    Bach PV, Schlegel PN. Oštećenje DNK sperme i IVSI i ICSI. Basic Clin Androl. 2016, 5 (26): 15.

    „... Jedinstveni proces zbijanja kromatina u ćelijama sperme ima važne implikacije za razvoj muških testova neplodnosti i za razumevanje karakteristika hromatina sperme, što može uticati na rezultate asistiranih reproduktivnih tehnologija. "

    Palermo GD et al. Perspektive procjene cjelovitosti kromatina ljudske sperme. Fertil Steril. 2014 Dec, 102 (6): 1508-17.

    “…Meta-analiza sa dvodimenzionalnim slučajnim efektom dala je AUC (područje ispod krive) od 0,92 sa osjetljivošću (95% interval pouzdanosti) od 0,80 (0,78–0,82) i specifičnosti 0,83 (0,80–0, 86) da koristi SDF test za diferenciranje neplodnih muškaraca od normalne kontrole plodnosti. Štaviše, analiza podgrupa je pokazala da je SDF analiza sa jednim TUNEL testom rezultirala AUC 0,9506 sa kombinovanom osetljivošću od 0,77 (0,74–0,8) i specifičnošću od 0,91 (0,87–0,94), dok su SCD i Comet testovi pokazali kombinovanu osjetljivost od 0, 77 (0,67-0,81) ili 0,91 (0,88-0,94) i specifičnost 0,84 (0,75-0,91) ili 0,63 (0,54-0.70) uz AUC od 0,84 ili 0,94 ... "

    Cui ZL et al. Dijagnostičke tačnosti TUNEL-a, SCD-a i analiza fragmentacije DNK na bazi kometa za mušku neplodnost: Meta-analiza. Clin Lab. 2015, 61 (5-6): 525-35.

    Šta je HALO test za procenu fragmentacije DNK?

    U laboratoriji SPERMA-TEST.ru indeks fragmentacije DNK se određuje metodom HALO (HALOSPERM).

    Za razliku od drugih metoda analize fragmentacije DNK spermatozoida, HALO metoda detektuje i „naglašava“ ne oštećenu, već cijelu DNK. Halo se formira oko “zdravih” spermija sa netaknutom DNK, koja je jasno vidljiva na optičkom mikroskopu. Takvih oreola nema kod muškaraca sa oštećenom DNK.

    Analiza indeksa fragmentacije DNK spermatozoida vrši se 30-60 minuta nakon razrjeđivanja ejakulata. U analizi se procjenjuje od 200 do 500 spermatozoida s repovima.

    Dostupnost: 1-3 radna dana

    Test za fragmentaciju DNK sperme: fotografija iz mikroskopa

    Spermatozoide sa intaktnom molekulom DNK imaju jasan veliki halo. Spermatozoidi sa fragmentacijom DNK (lomovima) nemaju takav halo ili nisu jasni.

    HALO test se zasniva na SCD metodi (patentirana od strane Halotech-a). Do danas, ova metoda se aktivno koristi u kliničkoj praksi i uključena je u mnoga klinička ispitivanja. HALO se smatra osjetljivijim testom u odnosu na ostale.

    Referentna vrijednost (norma) za ovaj test je 20% i niže.

    To znači da sperma sa fragmentacijom DNK mora biti manja od 20% od ukupnog broja.

    Kako se izvodi HALO test?


    Laboratorijski pomoćnik miješa spermu sa posebnim reagensom, čime započinje proces denaturacije DNK i zatim bojenje. Ako DNK sperme nije oštećen (nije fragmentiran), oko gustog centralnog jezgra DNK formira se jasan "halo". Ako je DNK sperme fragmentirana, onda ne postoji oreol, čak i ako se manifestuje, vrlo je tanak i nejasan. To se jasno vidi pod mikroskopom kada spermatolog-embriolog pronalazi spermu sa fragmentiranim DNK. Rezultat izračuna je izražen u procentima, i obično ne bi trebao biti veći od 20%.

    Za kompletnost testiranja, spermogram i EMIS (elektronsko mikroskopsko ispitivanje sperme) se obično izvode paralelno sa analizom fragmentacije DNK. Ako su napravljeni ranije, ali ne pre više od 3 meseca, pokažite ih svom lekaru za konsultacije. Sve tri analize mogu se izvesti iz jednog dijela sperme.

    Kako se pripremiti za studiju?

    Priprema podrazumeva apstinenciju od 2 do 5 dana.

    Metoda sakupljanja ejakulata - masturbacija.

    Kontejner za sakupljanje ejakulata - sterilni kontejner (besplatno kod laboratorijskog administratora)

    Neposredno prije prikupljanja materijala, potrebno je isprazniti sadržaj mjehura i oprati genitalije.

    Ako se test provodi više puta, trajanje apstinencije uvijek mora biti isto. Ovo je važno za poređenje rezultata tokom vremena.

    Ako se uzorak prikuplja kod kuće, kurir mora biti transportovan u laboratoriju u termalnoj kutiji.

    Rezultat testa HALO i njegova dekripcija

    Nakon studije, formira se HALO testni protokol, gdje se pokazuje indeks DNA fragmentacije.

    U nastavku su date opcije za rezultate i preporuke za taktiku liječenja. Ove preporuke su zasnovane na istraživanju koje su sprovele prave naučne grupe u proteklih 10 godina. Ovo je vrijedno istraživačko iskustvo, ali to su samo preporuke. Interpretirajte rezultate svog lekara i na osnovu istorije bolesti da biste ponudili opcije lečenja.

    Šta pokazuje indeks DNA fragmentacije? On odražava procentualni odnos između “zdravih” spermatozoida i spermatozoida sa prazninama u DNK lancima.

    Ako je rezultat HALO iznad 50%, preporučuje se korištenje ICSI tehnologije. Sa takvim rezultatima, ICSI će biti efikasniji od IVF-a.

    Ako je rezultat veći od 60%, šanse za trudnoću čak i uz pomoć asistiranih reproduktivnih tehnologija su izuzetno niske. Bolje je koristiti donorsku spermu.

    Ako je indeks fragmentacije DNK sperme 50% ili više, trudnoća je malo vjerovatna, čak i kada se koriste reproduktivne tehnologije.

    Kada dobijete rezultat HALO testa, svakako kontaktirajte androloga za pomoć.

    Fragmentacija DNK sperme - uzrok neplodnosti

    Jedan od uzroka muške neplodnosti je oštećenje (fragmentacija) lanca DNK koji se nalazi u jezgru glave sperme. U ovom molekulu nukleinske kiseline se kodira i pohranjuje sva genetska informacija, koja se pri začeću prenosi na dijete. I što je više takvih prekida u molekuli DNK, manja je verovatnoća oplodnje jajašca od strane spermatozoida.

    Fragmentacija DNK: šta pokazuje spermogram?

    Spermogram - zlatni standard primarne procene kvaliteta sperme. Standardi sperme nisu revidirani od 2010. godine. Uvođenjem Krugerove morfološke procjene, ova analiza je dosegla svoju maksimalnu dijagnostičku vrijednost. Međutim, do sada spermogram ne može objasniti ni polovinu slučajeva muške neplodnosti. Stoga su specijalisti za plodnost morali tražiti druge, dublje i specifičnije metode istraživanja.

    Nemoguće je dijagnosticirati lomove DNA tokom spermograma. Spermatozoidi sa oštećenom DNK obično održavaju dobru pokretljivost. Ponekad su čak sposobni za oplodnju, ali trudnoća koja slijedi prestaje ili se prekida u ranim fazama.

    Tokom proteklih 10 godina, nauka je potvrdila da je oštećenje DNK sperme direktno povezano sa oštećenjem oplodnje, kašnjenjem u razvoju embrija, slabom implantacijom i pobačajima. Ie sa svim poteškoćama početka i početka trudnoće.

    Imam dobru spermu. Nije otkrivena prospermija. Zašto moram da analiziram fragmentaciju sperme?
    Istraživanja u 2016. godini pokazala su da 10% muškaraca sa normalnim čitanjem sperme ima visok indeks fragmentacije DNK sperme i da su u kategoriji pacijenata sa idiopatskom neplodnošću (tj. Neplodnost iz nepoznatih razloga). Stoga je vjerovatno da imate sličan slučaj. A onda će vaša sperma sa normalnom pokretljivošću i morfologijom povećati šanse za uspešnu trudnoću.

    Kome je propisano testiranje fragmentacije DNA?

    Indikacije za propisivanje testova za fragmentaciju DNK:

    • idiopatska (neobjašnjena) muška neplodnost
    • propušteni pobačaj (odloženi razvoj embrija)
    • ponovljeni i neuspjeli ECO ICSI
    • ponavljajući pobačaj
    • varicocele
    • muškarci imaju 45 ili više godina

    Osim toga, test DNA fragmentacije se provodi prije zamrzavanja sperme donora kako bi se procijenio njegov kvalitet i tijekom pripreme za IVF (in vitro oplodnja) ili ICSI (intracitoplazmatska injekcija sperme).

    Analiza fragmentacije DNA i ART (IVF, ICSI)

    Analiza fragmentacije DNK pomaže da se odredi koja od metoda pomoći uz pomoć asistirane reprodukcije (ART) će pomoći određenom paru. Na primer, intrauterina inseminacija (IUI) i ekstrakorporalna oplodnja će pomoći parovima sa niskim i srednjim oštećenjem DNK kod muškarca. Parovi sa visokim nivoom oštećenja DNK će pomoći ICSI.

    Jedina grupa parova za koju analiza DNA oštećenja nije korisna je ona u kojoj je kod muškarca dijagnosticirana i potvrđena oligoastenoterozoospermija (tj. 3 prospermije odjednom). Samo ICSI može pomoći takvim parovima i iskusni androlog može odmah to reći.

    Analiza fragmentacije DNK je neophodna za parove sa idiopatskom muškom neplodnošću. Ie kada se dijagnozom utvrdi da je razlog kod muškarca, on ne može objasniti razlog, postaviti dijagnozu i propisati liječenje. Za par sa idiopatskom muškom neplodnošću, fragmentacija DNK će pomoći da se uštedi vreme bez trošenja na neuspešne pokušaje IVF-a, neefikasne režime lečenja i ukupno jačanje tela. Ne gubite vrijeme na prazno uzbuđenje, očaj i prazno čekanje.

    Zašto je DNK sperme fragmentiran?

    Jedan od najistaknutijih mehanizama oštećenja DNK lanaca je djelovanje slobodnih radikala (reaktivne vrste kiseonika). Oni oksidiraju molekulu DNK, nanoseći joj štetu.

    Da pojasnimo: Svi muškarci imaju slobodne radikale i oštećenja DNK. Ali normalno da nema mnogo takvih šteta, ali slobodni radikali moraju odoljeti antioksidantima.
    Antioksidansi štite spermije tako što apsorbuju slobodne radikale. Oni su bogati sjemenom plazmom - tekućinom u kojoj spermatozoidi „plutaju“.

    Da biste saznali koliko ovih potencijalno opasnih slobodnih radikala u muškoj spermi, izvedite Studiju reaktivnih formi kiseonika u nativnom ejakulatu (ROS) (tj. Kako jeste) ili Proučavanje reaktivnih oblika kiseonika u opranoj spermiji (ROS), ispiranje sperme iz semena plazma Kakvu vrstu testa treba obaviti - doktor može da kaže.

    Da bi se utvrdilo koliko se antioksidanti odupiru slobodnim radikalima, analizirati antioksidacijsku aktivnost sjemene plazme.

    1. Vanjski faktori: t

    • zračenja i toksičnih hemikalija
    • prethodne infekcije, uključujući polno prenosive infekcije,
    • nepovoljne klimatske i ekološke uslove u području boravka,
    • stres i nezdrava ishrana
    • pušenje, zloupotreba alkohola,
    • varikocela,
    • starost muškarca starog 40-45 godina
    • hronične bolesti urogenitalnog trakta,
    • hemoterapija
    • genetska predispozicija.

    2. Interni faktori:

    • nepotpuno sazrevanje muških reproduktivnih ćelija,
    • normalno, samo muško telo odbacuje većinu sperme lošeg kvaliteta, a samo nekoliko njih ulazi u ejakulat. Ako iz nekog razloga dođe do kvara u radu sistema odbacivanja, u spermi ima mnogo više „bolesnih“ zametnih ćelija. Kvalitet ejakulacije ne pati od toga, ali se smanjuje vjerovatnoća uspješne oplodnje.

    Postoje podaci iz studija koje potvrđuju da žensko jaje oplođeno spermatozoidom sa fragmentiranom DNK može „izliječiti“ i vratiti oštećenu genetsku strukturu. Ali uspjeh takvog "tretmana" određuje se prije svega biološkom dobi i zdravstvenim stanjem žene. Samo mlađa jaja, koja imaju veliki potencijal za popravak DNK spermatozoida, su u stanju da eliminišu takav defekt. Pored toga, od velikog značaja je stepen uništavanja i priroda oštećenja genetskih struktura.

    Testovi fragmentacije DNK sperme: HALO ili TUNEL?


    Indeks fragmentacije, za razliku od spermograma, pokazuje povrede integriteta DNK lanaca. Oštećena DNK često može biti kod muškaraca sa dobrim rezultatima sperme. Потому что сама молекула ДНК никак не влияет на основные параметры, тестируемые при анализе спермограмма: морфология, подвижность, количество сперматозоидов.

    Как только была обнаружена значимая взаимосвязь фрагментации ДНК с проблемами на ранних сроках беременности, начался настоящий бум в разработке методик. Новые методы анализа и исследований фрагментации ДНК появляются каждый год. Все они проходят клинические исследования, доказывают свою диагностическую значимость. В лаборатории SPERMA-TEST.ru определение Индекса Фрагментации ДНК проводится методом HALO (HALOSPERM).

    Что такое TUNEL-тест?

    Tunel-test je mikroskopsko ispitivanje sperme, čija je svrha da otkrije spermu sa oštećenom DNK i prebroji njihov broj.

    Metoda omogućava procjenu obima oštećenja DNK u spermi. Sperma se miješa sa posebnim reagensom. Počinje enzimatsku reakciju. Prelomi lanaca DNK sperme ispunjeni su fluorescentno označenim nukleotidom. Ovo se vidi pod mikroskopom kada spermolog pronađe spermu sa fragmentiranim DNK.

    Još prije 2-3 godine, TUNEL test je korišten svuda. Međutim, to je bio dug i naporan test. Sada se HALO test smatra osjetljivijim i informativnim, što potvrđuju kliničke studije. I rok u odnosu na TUNEL je smanjen za 5-7 puta. Zato ga u našoj laboratoriji koristimo.

    HALO test je potpuna alternativa TUNEL testu. Novi test je brži i efikasniji. Stoga preporučujemo da ga koristite.

    Proći analizu fragmentacije DNK (HALO): adresa, cijena, termini laboratorije.

    HALO test je studija koja se najbolje izvodi u specijalizovanoj laboratoriji u kojoj rade spermatolozi i embriolozi, a ne obični laboratorijski tehničari, poštuju se međunarodni standardi za istraživanje i principi medicine zasnovane na dokazima. Androlozi i stručnjaci za plodnost ne vjeruju rezultatima laboratorija mreže.

    Možete uzeti spermu za HALO test u laboratoriji za spermatologiju Sperma-test.ru.
    HALO test cost (alternativa TUNEL) - 6900 str.
    Adresa laboratorije u kojoj možete uzeti analizu:

    Moskva, 2. Kozhukovski prolaz, 12, str. 14, MK ECO "Karmenta"

    Možete zakazati termin i postaviti pitanje putem telefona: +7 (495) 787-79-30.

    Postupak proučavanja fragmentacije DNK u spermi

    Čovjek daje ejakulat, nastali materijal se stavlja u poseban sastav, a zatim se stanice analiziraju pod snažnom optičkom opremom i spermatozoidi se broje sa i bez fragmentacije DNA.

    Istraživanje pokazatelja zdravih muškaraca sposobnih za oplodnju - manje od 15% spermatozoida s oštećenim integritetom DNK, u slučaju muške neplodnosti, broj patoloških spermija u ejakulatu prelazi 30%. U ovom slučaju, vjerovatnoća trudnoće bez upotrebe IVF ICSI metode i njenih modifikacija je izuzetno niska, a povećava se i vjerovatnoća neplodne trudnoće.

    Indikacije za proučavanje nivoa fragmentacije DNK sperme

    • Neplodnost uparena
    • Varicocele,
    • Uobičajeni pobačaj,
    • Neuspeli pokušaji IVF-a,
    • Odstupanja u spermi,
    • Priprema za upotrebu asistiranih reproduktivnih tehnologija (IVF, ICSI),
    • Hronične upalne bolesti mokraćnog sustava.

    Muška neplodnost je nemogućnost muškarca da oplodi ženu, odsustvo željene trudnoće u paru tokom redovnih pokušaja začeća 1 godinu. Ako je starost buduće majke starija od 35 godina, izostanak trudnoće za vrijeme redovnog seksualnog života bez korištenja kontraceptivnih metoda duže od 6 mjeseci može se dijagnosticirati kao neplodnost.

    Ako se ne dogodi trudnoća u Vašem paru, vrijedi se obratiti specijalistu - andrologu i proći kroz kompleks istraživanja. Proučavanje fragmentacije DNK u spermatozoidima je obavezna komponenta pregleda u kršenju muške plodnosti kod „majke i djeteta“. Ispit uključuje:

    • Primarni pregled androloga,
    • Test sperme: spermogram, MAR test, elektronski mikroskopski test sperme (EMIS), test fragmentacije DNK u spermi,
    • Hormonsko ispitivanje: test krvi na nivo hormona štitnjače, polnih hormona i hormona "stres" - prolaktin,
    • Genetsko testiranje: kariotipiranje, studije mutacije u CFTR genu (gen cistične fibroze), studija AZF-lokusa na Y kromosomu,
    • Ultrazvučni pregled (ultrazvuk): skrotum, prostata, dopplerometrija (izvodi androlog).

    Na osnovu rezultata dijagnoze, kreira se individualni program tretmana. Svaki program za lečenje muške neplodnosti u "Majci i detetu" je stvoren interakcijom lekara raznih specijalizacija pod vođstvom androloga i specijalista za reprodukciju. Kolektivni pristup nam omogućava da postignemo najbolje rezultate u izboru taktike liječenja i ostvarivanju trudnoće u paru.

    Pin
    Send
    Share
    Send

    Pogledajte video: Do Cell Phones Lower Sperm Counts? (Mart 2020).

    Loading...