Popularni Postovi

Izbor Urednika - 2019

Šta je preimplantacijska dijagnoza u IVF-u i šta pokazuje?

U ovom odeljku ćete saznati:

Pripremajući se za proceduru in vitro oplodnje (IVF), svaka žena ili bračni par ima određeni strah povezan sa zdravljem nerođenog djeteta. Zaista, niko ne može da predvidi kako će doći do oplodnje i kako će embrion postati zdrav. Čak i neki apsolutno zdravi parovi (njihov udio je 5%) nakon začeća, dijete sa genetskom bolešću ili kromosomske abnormalnosti mogu se prirodno roditi, što čak i prenatalni pregledi ponekad ne mogu otkriti.

Srećom, danas postoje tehnike koje vam omogućavaju da identifikujete povrede u strukturi embriona u prvim danima njegovog razvoja. Prije svega, to je preimplantacijska genetska dijagnoza u IVF-u. Razmotrimo detaljnije šta je suština takve studije.

Iz naziva procedure već je jasno da se ova genetska dijagnoza provodi prije implantacije embriona, koji je koncipiran ekstrakorporalno, u maternicu žene. Uz prirodnu koncepciju PGD se ne provodi.

PGD ​​analiza u IVF-u je visoko-tehnološko istraživanje koje se provodi u najranije vrijeme razvoja embrija - trećeg ili petog dana. Glavna svrha postupka je da se odabere apsolutno zdrav embrion za dalje presađivanje u matericu. Ova analiza se izvodi na maloj količini biološkog materijala i mora se obaviti u kratkom vremenu.

Takođe je važno napomenuti da PGD mora imati odgovarajuće indikacije.:

  • starost trudnice je starija od 35 godina
  • Starost budućeg oca je iznad 45 godina
  • u porodici jednog ili oba buduća roditelja, iste onkološke ili genetske bolesti prenose se iz generacije u generaciju,
  • prisustvo majke u medicinskoj istoriji smrti fetusa (ili novorođenčeta) zbog Rh-konflikta,
  • uobičajeni pobačaj (pobačaj ili zaustavljanje razvoja embriona u ranoj trudnoći),
  • neuspjeli pokušaji IVF-a (više od tri)
  • niski muški spermogrami (oslabljena spermatogeneza, nizak broj spermija u sjemenoj tekućini, visok broj spermija sa abnormalnom strukturom).

PGD ​​omogućava otkrivanje i hromozomskih abnormalnosti i genetskih bolesti u embrionu. Nije isključeno da će nakon PGD (PGD) dijagnostike tokom IVF-a nekoliko rezultirajućih embrija, presađivanje biti potpuno otkazano zbog njihovog lošeg kvaliteta (to se može dogoditi iz različitih razloga). Što je žena starija, to je veći procenat odbacivanja embriona.

Studija kao što je PGD je djelimično alternativa prenatalnoj dijagnostici, ali je, naravno, ne može potpuno zamijeniti. Žene koje postanu trudne nakon IVF-a sa PGD-om, kao i sve ostale, treba da prođu rutinske ultrazvučne preglede i druge preglede za praćenje intrauterinog razvoja bebe.

Treba dodati da danas u Rusiji postoji nekoliko centara, gdje se različiti tipovi genotipa embriona procjenjuju metodom pred-implantacijske genetske dijagnoze PGD-a u IVF-u - u St. Visoka tehnološka opremljenost, kvalifikacija i dugogodišnja praksa embrioloških lekara, specijalista za reprodukciju, genetičari omogućavaju neplodnim parovima da postanu sretni roditelji zdravog djeteta.

PGD ​​- šta je to?

Od trenutka kada se žensko jaje stapa sa muškom spermom, sve je predodređeno na genetskom nivou - boju i rast dlake u kosi, intelektualne sposobnosti i pol, kao i moguće genetske abnormalnosti i bolesti koje je dete nasledilo od roditelja, djedova ili drugih rođaka .

Pre-implantacijska dijagnostika je kompleks genomskih studija, koji omogućava identifikaciju u embrionu, koji je star samo nekoliko dana, različitih razvojnih devijacija, bolesti, sindroma i drugih problema. PGD ​​je u stanju da identifikuje oko 150 nasljednih genetskih oboljenja, među kojima su prilično česti - Downov sindrom, Turner, i vrlo rijetko - cistična fibroza, hemofilija, sindrom leptira i sl.

Koristeći specijalne tehnike i visokopreciznu opremu, utvrđuju se i otkrivaju bolesni embrioni. Za transplantaciju u materničnu šupljinu, žene koriste samo kvalitetne, zdrave i održive embrije.

Standard IVF ne uključuje obaveznu fazu dijagnostike prije implantacije. Nakon oplodnje i uzgoja embriona tokom nekoliko dana, procenjuju se samo stope rasta, stope drobljenja i vitalnost embriona. Nakon toga se prenose u materničnu šupljinu žene. Koja od njih će se ukorijeniti i ukorijeniti uopšte je veliko pitanje. Efikasnost standardnog IVF-a je oko 35%.

Ako se izvrši predimplantacijska dijagnostika, budući roditelji možda neće brinuti o zdravstvenom stanju bebe, čak i ako sami imaju određene genetske probleme. Pored toga, efikasnost IVF-a sa PGD-om je nešto viša - oko 40-45%. To je zbog činjenice da veliki embrion, čak i ako je implantiran u matericu, ima vrlo male šanse za razvoj i preživljavanje. Zdrav i ispitan embrion ima veću šansu da stekne uporište i počne da raste i razvija se.

Svrha istraživanja

PGD ​​se snažno preporučuje roditeljima koji imaju genetske bolesti koje dijete može naslijediti. Takav preliminarni genetski pregled embriona ne bi bio povređen ako bi u redovima bliskih rođaka budućih roditelja postojale nasledne bolesti.

Dijagnoza prije implantacije je važna i neophodna za parove u kojima jedan od roditelja nosi bolest vezanu za spolni hromozom. Na primjer, žena nosi gen za hemofiliju, ali dijete će biti bolesno samo ako je muško dijete. PGD ​​u ovom slučaju određuje pol embriona koji su stari samo nekoliko dana, a lekari biraju samo embrione koji nisu ugroženi hemofilijom, odnosno devojkama, za presađivanje.

Žena sa negativnim Rh faktorom i nekoliko trudnoća u prošlosti (nije važno kako su završili), preporučuje se PGD, ako je sperma muža sa pozitivnim Rh faktorom korištena za in vitro oplodnju. U ovom slučaju, lekari će izabrati od svih nastalih embriona samo one koji su nasledili majčinski Rhesus identitet. U ovom slučaju, trudnoća nakon IVF će se nastaviti sa manjim rizikom, a beba neće biti izložena riziku od hemolitičke bolesti.

PGD ​​se preporučuje paru ako je žena ranije imala dva ili više pobačaja, ako je bilo slučajeva propuštenog pobačaja, kao i ako bilo koji od supružnika u prvom braku ili zajedno imaju dijete sa kromosomskim abnormalnostima ili genetske patologije. Dijagnostika pre transfera omogućava da se iz broja embriona koji se smatraju za transplantaciju isključe oni koji su bolesni ili imaju anomalije ne-genetskog porekla.

Pre-implantacijska dijagnostika u drugom ili trećem IVF protokolu omogućava da se s velikom točnošću utvrde uzroci neuspjelih prethodnih pokušaja.

I potpuno nestandardna, ali, nažalost, stvarna situacija - roditelji odlaze u IVF da imaju bebu koja može postati donator, na primer, koštane srži, za svog starijeg brata ili sestru. U ovom slučaju, oslanjanje na prirodno začeće je previše rizično. Rođeno dijete možda nije prikladno kao donator za bolesnog rođaka.

Pre-implantacijska dijagnostika će pomoći da se odaberu pojedinci iz rezultirajućih embrija određenom kombinacijom genetske informacije koja garantira genomsku podudarnost između djece. Ova studija se naziva HLA-tipizacija.

Šta pokazuje istraživanje?

Pre-implantacijska genetska dijagnostika vam omogućava da unaprijed utvrdite različite bolesti i stanja u kojima dijete može biti neodrživo ili onesposobljeno. Sve zavisi od preporuka genetičara. Ako je potrebno, embrioni se ispituju samo za određene kriterijume i mutacije gena, ali općenito postoji mogućnost procjene svih parametara određenih studijom.

Na primer, PGD sa tačnošću od 97-99% određuje slepilo i gluhoću, urođenu gluhoću, retinoblastom, Fanconi anemiju, neurofibromatozu, fenilketonuriju, miopatiju, torzionu distoniju, mišićnu distrofiju Duchene i nekoliko desetina drugih opasnih i neizlečivih bolesti i sindroma.

PGD ​​takođe određuje kariotip embriona, njegovu krvnu grupu i Rh faktor, pol, prisustvo mutacija na nivou gena, neobično za roditelje i prvi put se manifestuje.

Ko je propisan?

Budući da sama dijagnostika prije implantacije nije jeftino zadovoljstvo. Ne preporučuje se svaka žena koja se usudila na in vitro oplodnju. Nudi se svima, ali postoje kategorije pacijenata koji su veoma nepoželjni zbog odbijanja preliminarne genetske procene embriona pre transfera u matericu.

Ti pacijenti uključuju:

  • "Age" žene i parovi. Sa godinama, muške i ženske seksualne stanice stare i gube zdravlje. Pod uticajem droga, loših navika, nepovoljne ekologije i samo proteklih godina, njihov DNK skup može mutirati. Stoga, kod žena i muškaraca u “uzrastu”, rizici od fetalnih kromosomskih abnormalnosti su veći. PGD ​​se preporučuje ženama starijim od 35 godina, kao i parovima u kojima je muškarac stariji od 40 godina.
  • Rh-negativne ženekoji su imali abortuse, pobačaje, porođaj, deca su rođena sa hemolitičkom bolešću. Dijagnoza je relevantna samo ako supružnik ima pozitivan faktor krvnog rezusa. Ako se koristi donorska sperma, tada se muški biomaterijal inicijalno bira sa negativnim Rh faktorom, a verovatnoća dobijanja Rh pozitivnih embriona je nula.
  • Žene koje već imaju iskustva sa 1-2 neuspješna IVF pokušaja u nedostatku objektivnih razloga (protokoli su sprovedeni korektno i bez komplikacija, nema endometrioze i drugih prepreka implantaciji).
  • Ako se muška sperma koristi za oplodnju sa niskim pokazateljima kvaliteta sperme (teratozoospermija, azoospermija, astenoozospermija). Prirodnim začećem umiru nisko-kvalitetne spermije, nemaju šanse za oplodnju, sa IVF-om mogu dobro oploditi jaje, jer je narušena prirodna selekcija, što može dovesti do razvoja različitih patologija u fetusu.

Vrste dijagnostike

Postoji nekoliko tipova genetske dijagnoze embriona. Razlikuju se po istraživanjima, tehničkim nijansama, opremi i metodama istraživanja. Navešćemo glavne bez ulaženja u laboratorijske i genetske detalje:

  • FISH - Ovo je metoda fluorescentne hibridizacije. Ovo je prilično standardna studija, čiji je trošak nizak u poređenju sa drugim metodama predimplantacijske dijagnostike. Ali njena preciznost je nešto niža nego kod drugih metoda. Ova metoda se široko koristi u klinikama u Rusiji, Ukrajini i Bjelorusiji. Strane klinike praktično su je napustile zbog činjenice da su se pojavile preciznije studije. Plus činjenica da se studija odvija brzo - u roku od nekoliko sati. Loša strana je da mnogi hromozomi nisu čak ni istraživani.
  • CGH - komparativna metoda genomske hibridizacije. Vrlo skup način. I finansijski i privremeno. Ali lista identifikovanih patologija je veća od one gore opisane metode, a tačnost je neizmjerno veća. Između ostalog, ova metoda dijagnostike prije presađivanja vam omogućava da odredite koji embrioni imaju veće šanse za implantaciju.
  • PCR - metoda lančane reakcije polimeraze. Otkriva Rhesus identitet embrija, njegovu krvnu grupu, kao i prilično veliku listu genetskih problema. Studija zahtijeva obavezno preliminarno ispitivanje bioloških roditelja za genetske mutacije. Ako žena dobije donatorski embrion ili se donose oociti za oplodnju, PCR metoda se ne može koristiti.
  • Ngs - metoda sekvenciranja. To je savremena metoda predimplantacijske dijagnostike, koja kombinuje najbolje od svih gore navedenih. Međutim, ona daje najkompletniju sliku zdravstvenog statusa embrija, a njegova cijena je viša od cijene drugih metoda.

Kako ide istraživanje?

Da bi embriolozi i genetičari imali sposobnost obavljanja PGD-a, mora se dobiti dovoljan broj jaja kroz prethodnu hormonsku stimulaciju. Ako je manje od 3-4, onda se dijagnoza obično ne vrši. Nakon što lekari "organizuju" sastanak jaja sa prečišćenom spermom, razvoj embriona prati se 2-5 dana. Tada embriolog može da izabere najodrživije. Petog dana, blastociste već imaju oko 200 ćelija. Moguće je, bez predrasuda prema embrionu, uzeti 5-7 ćelija iz svakog embriona za genetska istraživanja.

Za prikupljanje ćelija koriste se moderni laseri visokog stepena preciznosti, ćelijske ljuske se biopsiraju, a koriste se i druge metode. Istraživanje DNK lanca pruža sveobuhvatne informacije o tome da li je embrion zdrav. Nakon toga se preporučuje za prijenos.

Ako se par slaže sa preliminarnom genetskom dijagnozom embriona, sam prenos embriona može biti odložen. Ako se standardnim IVF protokolom provodi 2, 3 ili 5 dana od trenutka oplodnje, onda se mogu očekivati ​​rezultati PGD-a od nekoliko sati do 5-6 dana. Tako se IVF ciklus produžava za najmanje jednu sedmicu. Troškovi protokola mogu se povećati u slučaju pristanka na preliminarnu dijagnozu embrija za 40-240 hiljada rubalja.

Sve zavisi od toga koliko embriona planirate da ispitate, koji metod će biti testiran.

Da bi se smanjili troškovi, par može koristiti alate za kvote, dijagnostika je uključena u listu usluga koje OMS može pružiti, ali svaka klinika bi trebala pojasniti ovo pitanje posebno. Neki rade PGD na račun budžeta, drugi - ne.

Moguće komplikacije

Kao što je već spomenuto, materijal za proučavanje genetike se dobija biopsijom. Uprkos ultramodernoj preciznoj opremi, još uvek postoji mogućnost povrede fetusa tokom ove procedure. Najčešće povređeni su podložni "tri dana". Treba napomenuti da je verovatnoća povrede prilično niska - oko 3%, a koristi od studije će biti mnogo veće. U suprotnom, komplikacije sa ovim IVF-om mogu biti iste kao kod IVF-a u standardnom protokolu.

Bilo koja od faza in vitro oplodnje može biti povezana sa određenim rizicima, a to neće nikuda ići. Važno je da su svi rizici niski.

Par mora biti svjestan da čak i moderni i precizni instrumenti kojima liječnici najviše kategorije kvalifikacija ne garantiraju 100% da će dijete biti zdravo. Tako se, uz obiman mozaicizam, mogu pojaviti biološke greške, a oboljeli embrion se može prenijeti na ženu. Ova verovatnoća je, ali je veoma mala - ne više od 0,05%.

Prema zvaničnim podacima Svetske zdravstvene organizacije, IVF sa PGD povećava šanse za uspeh protokola za oko 7-10% u odnosu na osnovni 35%. Međutim, nema mnogo pozitivnih recenzija u ruskom segmentu interneta o dijagnostici pre implantacije.

Neke žene primjećuju da je stopa preživljavanja zametaka iz kojih su stanice uzimane za analizu nešto lošija, pa stoga ima dosta pregleda neuspješnih IVF protokola s preliminarnom genetskom dijagnozom fetusa. Lijek ne potvrđuje ovo javno mišljenje, a zvanična statistika statistike ne ukazuje na smanjeni postotak uspješne implantacije nakon pregleda embrija.

Žene često pitaju da li je moguće napraviti IOP za izbor pola djeteta, jer pored činjenice da zaista želim djecu, još uvijek želim sina ili kćer. Ne postoji tehnička sposobnost da se odredi pol, ali nijedan lekar neće izdvojiti embrione „nepotrebnog“ pola, osim ako ne postoji specifična indikacija genetike. (za bolesti povezane sa spolnim hromozomom). Diskriminacija embriona po polu je zabranjena zakonom u Rusiji.

Prema kritikama, sam proces dijagnostike, koji može trajati nekoliko dana, daje ženama mnoga iskustva, jer ona do sada ne zna koliko je visoko kvalitetnih embriona bilo i da li su se uopšte ispostavili. Помимо того, ей нужно поддерживать состояние эндометрия в нужной форме -принимать назначенные лекарства, сдавать кровь на прогестерон, делать несколько УЗИ, чтобы определить толщину функционального слоя матки. Это важно, чтобы перенос прошел максимально успешно и плодное яйцо смогло имлантироваться.

Случается, что пока идет диагностика, «удачное» для переноса время проходит. U ovom slučaju, protokol se može prekinuti, a embrioni koji su prošli test zamrznuti su i poslani u kriobanku. Prenos će biti u narednom protokolu.

O zamršenosti preimplantacijske genetske dijagnoze pogledajte sledeći video.

lekar, specijalista psihosomatike, majka četvoro dece

Šta je PGD

Kromosomski set jajeta ili embriona se proučava u laboratoriji. S obzirom na rani razvoj embriona, rizik od povrede se smanjuje na 1%. Procedura je propisana paralelno sa glavnim tretmanom predviđenim protokolom. Međutim, potrebno je više folikula, tako da se hormonska stimulacija jajnika vrši u intenzivnijem režimu.

Nisu sve hromozomske mutacije kod roditelja opasne po zdravlje djeteta. Razvoj patologije zavisi od znakova i kombinacije gena kod mame i tate.

Postoje dva tipa mutacijskih znakova: dominantni i recesivni. Prenos dominantnog mutantnog gena na bebu povećava rizik od patologije kod djeteta za 50%. Ako su roditelji nosioci recesivnog svojstva, tada će se pojaviti genetska bolest kada se oba „bolesna“ gena mame i tate prenose na dijete.

Pored toga, neke genetske patologije povezane sa seksom. Dakle, ženski dvadeset treći kromosomski par izgleda kao XX, a muški XY. Stoga, povrede u jednom kromosomu žena neće uzrokovati bolest, jer će druga blokirati njeno djelovanje. Zdravo rođeno dijete će nastaviti "nosač" neispravnog kromosoma.

Muškarci nemaju takvu zaštitu, pa će ih dječaci roditi genetskom patologijom, a djevojčice u polovini slučajeva postat će nositelji “defektnog” kromosoma.

Koristeći predimplantacijsku genetsku dijagnozu embriona, genetika uspostavlja specifičnu kombinaciju koju embrion nasljeđuje. Dobijene informacije nam omogućavaju da utvrdimo da li je dete rođeno sa patologijom ili će postati samo nosilac kromosomskog defekta. Ispitivani su svi embrioni dobijeni od kojih su odabrani najčistiji.

Ova analiza se ne bi trebala miješati sa pre-implantacijskim genetskim skriningom. Razlika između PGD i PGS je značajna. PGD ​​se provodi kako bi se identificirale neizlječive genetske patologije i minimizirali rizici oboljenja djeteta. PGS je studija koja vam omogućava da odredite broj hromozoma, aneuploidija koja je kompatibilna sa rođenjem i fetalnim razvojem embriona. Jednostavno rečeno, zadatak ASG-a je da poveća šanse za trudnoću izborom zdravih embriona. Roditelji kojima je propisan PGS nemaju nikakvu nasljednu patologiju, ali postoji rizik od njihove pojave.

Dakle, procedura in vitro oplodnje provodi se zajedno sa PGD-om za te namjene:

  • „Spriječiti“ embrione koji imaju neispravne gene za presađivanje,
  • Saznajte zašto su prethodni IVF protokoli završeni bez uspjeha,
  • Smanjenje rizika od dobijanja bebe sa patologijom roditelja domaćina,
  • Odredite pol bebe, eliminišući hromozomske abnormalnosti po polu,
  • Identifikovati embrione koji imaju predispoziciju za patologije genetskog tipa,
  • "Nađite" embrion koji je optimalan sa HLA sistemom sa drugom djecom iz porodice koja može postati davatelj tijekom liječenja,
  • Smanjiti vjerovatnoću pobačaja u ranim fazama,
  • Smanjiti mogućnost hemolitičke bolesti,
  • Izaberite jedan “idealan” embrion, eliminišući mogućnost višestruke trudnoće.

Genetska dijagnostika može identifikovati i eliminisati takve opasne patologije:

  • Tay-Sachsova bolest,
  • Anemija srpastih stanica,
  • Gaucherova bolest,
  • Verdnig-Hoffmanova bolest,
  • Retinoblastom,
  • Horey Huntington,
  • Downov sindrom,
  • Neurofibromatoza,
  • Hemofilija,
  • Myopathy
  • Achondroplasia,
  • Phenylketonuria,
  • Alpersov sindrom,
  • Bolest policističnih bubrega
  • Duchenneova mišićna distrofija,
  • Retinitis pigmentosa,
  • Gottingtonova bolest,
  • Dyushen Myodystrophy,
  • Cistična fibroza
  • Anemia Fanconi,
  • Gluvo-nijemi
  • Torziona distonija,
  • Pemphigus,
  • Edwardsov sindrom.

Ova lista nije ograničena na prikazane patologije: postoji ih više od 150 vrsta.

Imajte na umu da se evidentiraju slučajevi lažnih negativnih rezultata. Činjenica je da neke metode istraživanja dijagnosticiraju samo određeni broj hromozoma. "Neodređeni" geni mogu biti neispravni.

Ponekad postoji mozaički razvoj mutacija. Tokom studije, ćelija se dijagnostikuje kao zdrava, a mutacija se javlja tokom njenog razvoja.

Kada je PGD neophodan?

Već smo rekli da PGD nije učinjen svim pacijentima koji su se prijavili za in vitro oplodnju. Postoje određene indikacije za postupak:

  • Roditelji su nosioci kromosomskih defekata, tako da je rizik od prenosa genetskih abnormalnosti kod beba veoma visok. "Nosač" obezbeđuje prisustvo hromozomskih pregradnji ili monogenih bolesti.
  • Starosna kategorija roditelja: majke starije od 36 godina, očevi čija je starost premašila 40 godina. Što su stariji supružnici, veći je rizik razvoja mutacija gena, čak i ako potencijalni roditelji imaju “pravi” set hromozoma.
  • Nakon prethodnih trudnoća, rođena su djeca koja su umrla od Rh-konflikta.
  • Neispravni geni i hromozomi su identifikovani u jajima i spermi.
  • Spermogram je identifikovao ozbiljne abnormalnosti kod muškarca (patologije kao što su azoospermija ili oligozoospermija),
  • Prethodni pokušaji da se zatrudni sa IVF-om su bili bezuspješni,
  • Pojava trudnoće završava se pobačajima u ranim fazama razvoja embrija,

S obzirom na impresivnu listu genetskih bolesti, PGD za IVF se vrši svim ženama čije su godine prešle trideset pet godina. Razlog tome su promjene vezane za godine koje mogu donijeti neugodna "iznenađenja" čak i tijekom prirodne trudnoće. Starenje jaja se ubrzava i pogoršava takvim faktorima:

  • Dugotrajna terapija jakim lijekovima
  • Životni stil u prošlosti povezan sa konzumacijom alkohola, nikotina, droga,
  • Hronična patologija,
  • Opasni uslovi profesionalne aktivnosti,
  • Bad ecology.

Genetska dijagnoza je prikazana u takvim slučajevima:

  • Rođenje bebe je povezano sa dobijanjem odgovarajućih matičnih ćelija kompatibilnih sa HLA sistemom da bi se izlečilo starije dete,
  • Neusklađenost rezus faktora
  • Supružnici su bliski rođaci,
  • Par je bio izložen zračenju.

IVF sa PGD značajno povećava troškove protokola. Stoga, žena samostalno odlučuje o potrebi za studijom. Podsjetimo se da je oplodnja in vitro samo u 20-40% slučajeva završena trudnoćom. Genetska dijagnoza ne samo da će identificirati moguće mutacije gena, već i značajno povećati šanse za uspješno začeće.

Priprema i sprovođenje PGD sa IVF

Priprema za pred-implantacijsku genetsku dijagnozu embrija uključuje konsultacije i potpuni pregled bračnog para sa odgovarajućim indikacijama. Lekar detaljno opisuje prednosti i nedostatke procedure. Ženi je objašnjeno da genetska dijagnostika zahtijeva veći broj zrelih jaja. Stoga će se intenzivirati hormonska stimulacija jajnika, što povećava rizik od prekomjerne stimulacije tijekom IVF-a. Posle svih dijagnostičkih mera, pređite na PGD proceduru.

Sastoji se od sedam faza:

  1. Vađenje jaja i njihova oplodnja u laboratoriji,
  2. Fetalni razvoj koji traje 3-5 dana,
  3. Izbor "najboljih", najizvodljivijih embriona,
  4. Ekstrakcija ćelija iz biopsijskog embriona,
  5. Fiksiranje blastomera,
  6. Hibridizacija,
  7. Dekodiranje primljenih informacija.

Još jednom se prisjećamo da studija neće utjecati na zdravlje embrija: organi i tkiva nerođenog djeteta "ne sudjeluju" u postupku.

Nakon dešifriranja, genetičar razdvaja pogodne i "defektne" embrije. Ako se otkriju 2 kromosoma koja zadovoljavaju standarde, tada se takvi embrioni podvrgavaju presađivanju. Razvijanje jaja sa poremećenim abnormalnostima ne može se implantirati.

PGD ​​metode

Savremena reproduktivna tehnologija vrši PGD embriona na 4 načina:

Razmotrite specifičnosti svake tehnike.

Molekularna citogenetička metoda je drugo ime metode. Široko se koristi u post-sovjetskom prostoru, ima najdemokratskiju vrijednost. Značajan nedostatak fluorescentne in situ hibridizacije (ribe) je netačnost dijagnoze, jer se ovom metodom ispituje samo dio kromosoma.

Za PGD metodu riba će trajati 5 sati. Za to vreme genetičar će odrediti sledeće važne faktore:

  • Hromozomska sekvenca
  • Gender baby,
  • Prisustvo najčešćih genetskih abnormalnosti.

Metoda se naziva komparativna genomska hibridizacija. Trebat će mnogo više vremena i koštati više. Međutim, tehnika ima niz važnih prednosti koje ga razlikuju od drugih tipova istraživanja:

  • "Pronalazi" najizazovnije embrione sa najboljim potencijalom za implantaciju,
  • Testira mnogo matičnih ćelija, što značajno smanjuje rizik od pogrešne dijagnoze,
  • Dijagnostičke mjere se provode sa zamrznutim jajima koja će se prenijeti u krioprotekol.

PCR je lančana reakcija polimera. On je u stanju da "pronađe" ne samo defekte u funkcionisanju hromozoma, već i monogene patologije. Koristeći PCR, određena su antitela roditeljske inkompatibilnosti i Rhesus embriona.

Važan uslov prije provođenja istraživanja je obavezna dijagnoza roditelja za prisustvo mutacija gena. Ovakva studija će eliminisati greške u dijagnostici patologije nastale mutacijom ćelija.

IVF pomoću donorskog jajeta ne omogućava studiju pomoću PCR.

Sekvenciranje visoke propusnosti je najnaprednija dijagnostička metoda PGD. Sekvenciranje sadašnje generacije je najskuplja i najefikasnija genetska dijagnoza koja vam omogućava da istražite svih 23 para kromosoma. Izvršena je cjelokupna genomska analiza, jer se tijekom ispitivanja ispituje ispravnost DNA sekvence.

Troškovi genetske dijagnoze

IVF zahtijeva ozbiljnu potrošnju. Genetska dijagnostika povremeno povećava cenu, jer su oprema i materijali za proceduru veoma skupi.

Nemoguće je dati jasan odgovor koliko košta PGD, jer cijena studije ovisi o nekoliko faktora:

  • Dijagnostička metoda
  • Broj ispitivanih embriona,
  • Koristeći dodatne testove,
  • Studija translokacije hromozoma.

Cena dijagnoze zavisi od broja istraženih anomalija.

U Moskvi, cijena PGD-a po embrionu je od 25.000 do 30.000 rubalja. Za sveobuhvatnu anketu morate platiti od 100.000 do 250.000 rubalja.

Relevantnost PGD analize

Glavna prednost PGD dijagnostike je da se sve medicinske procedure provode prije trudnoće, dok je fetus još uvijek izvan materice. Analiza je relevantna za parove sa povećanim rizikom da embrioni imaju ozbiljne hromozomske abnormalnosti koje će uzrokovati:

  • pobačaj
  • problemi sa implantacijom
  • gubljenje trudnoće
  • rođenje djeteta koje će imati intelektualne ili fizičke poteškoće.

Citat: "Pravovremeni PGD embriona pomaže u sprečavanju problemskih situacija, mnogo puta povećava šanse da se trudnoća završi rođenjem zdrave bebe."

Marina V. Shapnevskaya, embriolog klinike „Za rođenje“

Zanimljivo je da IVF sa PGD-om omogućava planiranje čak i spola fetusa.


Skupljanje stanica za PGD analizu

Indikacije za PGD sa IVF

Ne svi parovi koji odluče da se podvrgnu IVF-u, rade PGD dijagnostiku. Za ovu vrstu istraživanja postoje stroge medicinske indikacije. U pravilu, supružnici koji imaju visok rizik prenošenja opasnih genetskih poremećaja djeci postaju kandidati za preimplantacijsku analizu.

Glavni ciljevi PGD-a u IVF-u su:

  • skrining embriona sa abnormalnostima kariotipa,
  • minimiziranje rizika transfera embriona u šupljinu materice, koja će imati genetske abnormalnosti,
  • pravovremeno otkrivanje embriona koji imaju predispoziciju za teške genetske poremećaje,
  • utvrđivanje pola nerođenog djeteta kako bi se spriječio prijenos bolesti povezanih sa spolom,
  • utvrđivanje razloga zbog kojih se implantacija nije pojavila u prethodnim pokušajima in vitro oplodnje,
  • identifikaciju Rh faktora embriona kako bi se isključilo rađanje deteta sa hemolitičkom bolešću,
  • obavljanje HLA-tipizacije, ako buduće dijete treba da postane donator za starijeg brata ili sestru.

Istraživanje dobijenog biološkog materijala

Indikacije za dijagnozu embriona prije IVF su:

  • starost žene je iznad 35 godina, a muškarac je stariji od 40 godina,
  • abnormalnosti spermatogeneze,
  • jedan od supružnika je nosilac kromosomskih ili genetskih patologija u zametnim ćelijama,
  • više neuspjelih pokušaja IVF-a,
  • uobičajeni pobačaj kod žena (ako postoje dva ili više pobačaja u istoriji),
  • fetalna smrt tokom prethodne trudnoće zbog Rh-konflikta.

Metode predimplantacijske genetske dijagnostike embriona

IVF sa PGD može uključivati ​​samo jaja ili gotove embrione. Ova druga opcija je poželjnija, budući da je što je moguće informativnija - postoji samo ženski genetski materijal u jajnoj ćeliji, a oba roditelja u embrionu.


Uzorkovanje materijala za PGD analizu obično se provodi 3. dana

Tokom analize, izvršena je biopsija jednog blastomera u embrionu od četiri do deset postojećih koji su u fazi odvajanja. To se obično dešava trećeg dana. Izvršene manipulacije ne utiču negativno na budući fetus.

Kada se embrioni provjere (traje do dva dana), prenose se u materničnu šupljinu, kao u uobičajenom IVF protokolu. Važno je da se presađivanje obavlja najkasnije petog dana razvoja ljudskog tela.

Ako se koristi krioprezervacija, onda je dijagnostički potencijal PGD širi. Dakle, ako uzmete biopsiju, a zatim sačuvate embrione, možete obaviti sve neophodne studije bez žurbe i ponovo presaditi sledeći ciklus.

Metode za PGD embrione

Postoji nekoliko efikasnih metoda preimplantacijske dijagnostike:

  • FISH. Važno je ako treba isključiti prisustvo strukturalnih ili numeričkih kromosomskih abnormalnosti - translokacije i aneuploidije. Materijal dobijen tokom biopsije prenosi se na staklenu pločicu, zagrijava na određenu temperaturu, a zatim postepeno hladi. U ovom slučaju, ljuska je slomljena, citoplazma izlazi. Segmenti DNK obeleženi su specijalnim bojama - fluorescentnim sondama. Nakon toga, upotrebom fluorescentnog mikroskopa, genetičar može brojati broj hromozoma, provjeriti ima li nenormalnih među njima.
  • Ngs. Ovo je najnoviji PGD dijagnostički metod u kriociklu, pomoću kojeg možete temeljito pregledati 23 kromosomska para. Tačnost podataka dobijenih korišćenjem NGS-a je 99,9%, odnosno greške nisu vjerovatne. Tehnologija takođe omogućava da se detektuju hromozomske i monogene anomalije, mutacije, da se razlikuje translokacija od zdravog hromozomskog skupa, čime se eliminiše potreba za biopsijom blastomera.
  • Lančana reakcija polimeraze (PCR). Tehnika čiji je cilj identifikacija specifičnih kopija DNK. Da bi se to uradilo, prvo se denaturira da se odvija dvostruka nit. Zatim uzimaju jedan fragment, dodaju mu specifične enzime i polako udvostručuju količinu genetskog materijala. To omogućava istraživaču da vidi defektne nukleotidne zone. PCR metoda je prikazana kada je neophodno isključiti prenošenje monogenih bolesti na dijete (ako je jedan od njihovih partnera ili oboje od njih nosioci nezdravih gena ili imaju kliničke manifestacije opasne genetske patologije).

Treba napomenuti da metode PGD u IVF-u nisu stopostotno zamjenjive. Svaki od njih je dizajniran da identifikuje specifične grupe bolesti. Stoga, samo doktor može da odluči koji od metoda je pogodniji za bračni par koji se prijavio za njega.


PGD ​​- garancija za rođenje zdrave bebe

PGD ​​embrioni - troškovi usluga

PGD ​​embriona za IVF je prilično skupa usluga. U moskovskoj klinici „Za rođenje“ njegova cena varira od 83.500 do 90.500 rubalja. Ova procedura je veoma složena i uključuje upotrebu skupe opreme i inovativnog potrošnog materijala. Da bi ga sproveli mogu samo stručnjaci najvišeg nivoa.

U klinici „Za rođenje“

Relativno visoka cijena genetske dijagnoze prije implantacije povezana je sa složenošću manipulacija. Ako pratite ponude specijalizovanih klinika, PGD se može proslijediti pod povoljnijim uvjetima.

Novac koji se plaća za PGD analize uvijek se plaća - na kraju krajeva, u pitanju je rođenje zdravog djeteta. Tretman i održavanje bebe sa ozbiljnim genetskim poremećajima troši roditelje na mnogo veću količinu.

Опасно ли ЭКО с ПГД?

Преимплантационная генетическая диагностика применяется во всем мире. Ее безопасность научно доказана. Биопсия осуществляется только на том этапе развития эмбриона, когда его клетки еще не дифференцированы. To znači da će sa daljim drobljenjem uklonjena ćelija biti zamijenjena drugim bez ikakvih posljedica za budući fetus.

PGD ​​ne povećava vjerovatnoću razvojnih defekata kod djeteta, već naprotiv, garantira rođenje zdrave bebe.

Oni su radili pgd u NGC u Sankt Peterburgu, čitav protokol je takođe bio tamo. Moj muž i ja smo stari (38 i 40 godina), vrlo zabrinuti! I za dobar razlog. Doktor Gvasalia je rekao da je u našem slučaju pgd praktično obavezna procedura. Proverena su četiri embriona, procedura je otkrila najzdravije: dva su zasađena. Odrastao dva meseca. )
Procedura je neverovatna i veoma korisna !! Naravno, brinuli smo se da je biopsija opasna, ali u NGC-u su nam sve objasnili, čak su pokazali i video o tom procesu, i zaista nema ništa loše u tome, samo prednosti! Još uvek postoje različite metode pgd, izabrali smo NGC. Prema rečima lekara, najprecizniji.
>> PGD ne povećava verovatnoću razvojnih defekata kod deteta, već, naprotiv, garantuje rođenje zdrave bebe.

Istina je! Koristimo modernu tehnologiju, mi smo u 21. veku))

Opći koncepti

Pre-implantacijska genetska dijagnostika omogućava sveobuhvatno ispitivanje i isključivanje prisustva kromosomskih abnormalnosti uopšte ili jednog specifičnog odstupanja. Nedavno je paralelno sa ranim defektima izvršen i skrining gena koji mogu izazvati pojavu tumora u odraslom dobu (jajnici, creva, grudi).

U slučaju prenošenja genomskih bolesti kod majke, vrši se biopsija nekoliko polarnih jajnih ćelija prije oplodnje. Opisane metode predstavljaju alternativu ranoj prenatalnoj dijagnostici, koja vam omogućava da spriječite prekid trudnoće, ako fetus iznenada ima genetsku patologiju.

Pre-implantacijska genetska dijagnoza vam omogućava da odredite pol buduće bebe već u procesu skrininga. Koristi se za sprečavanje razvoja anomalija povezanih sa seksom.

Ko je pregledan?

Predimplantacijska genetska dijagnostika (PGD) izvodi se u sljedećim slučajevima:

  1. Prisustvo jednog ili oba nasledna oboljenja ili promene u kariotipu. Često, sami partneri znaju za svoje probleme, rjeđe - saznaće u procesu skrininga.
  2. Uobičajeni pobačaj. Problem sa ovim nijesu anomalije od strane roditelja (one možda uopšte nisu), već genetske mutacije fetusa koje izazivaju pobačaje.
  3. Starost osoba koje prolaze kroz IVF program je preko 38 godina.
  4. Više od 3 neuspješna pokušaja in vitro oplodnje u povijesti.
  5. Muška neplodnost.
  6. Uključivanje ICSI (intracitoplazmatska injekcija sperme) u program oplodnje. Proces je prepun razvoja genetskih abnormalnosti u embrionu.
  7. Slučajevi proklizavanja u istoriji.

PGD ​​Features

Istraživanja u oblasti pre-implantacijske genetske dijagnoze ukazuju na to da metoda ima pravo na postojanje, pomaže u dijagnosticiranju i sprečavanju hromozomskih abnormalnosti, međutim, zahtijeva daljnje poboljšanje.

Značajke PGD su sljedeće:

  • stopa pobačaja pri skriningu je niža nego bez nje,
  • Trenutno nema dokaza da se mogućnost trudnoće povećava,
  • postoji mogućnost lažnog rezultata: embrion je zdrav, a rezultat pokazuje abnormalnosti, embrion je bolestan, a studija pokazuje drugačije (5-10% slučajeva).

Provođenje predimplantacijske genetske dijagnostike (ispitivanje blastomera)

Nakon dogovora o in vitro oplodnji, reproduktolog procjenjuje potrebu za PGD bračnog para. Ako postoje dokazi, partneri se mogu dogovoriti ili odbiti postupak. Potom je potpisan dokument kojim se potvrđuje dozvola za sprovođenje ankete.

Trećeg dana nakon oplodnje embriona genetičar uzima jednu od formiranih ćelija blastomera za analizu. Vjeruje se da to nema efekta na fetus, jer su sve stanice međusobno zamjenjive.

Specijalista sprovodi istraživanja u jednoj od prethodno izabranih oblasti: proučavanje strukture ćelije pod specijalnim fluorescentnim mikroskopom, proučavanje DNK, metodom lančane reakcije polimeraze, za utvrđivanje prisustva mutacije.

Na osnovu rezultata, embrioni koji imaju anomalije neće se koristiti u procesu implantacije. Izbor zdravog i kvalitetnog. Tada se jedan ili više njih prenosi u materničnu šupljinu majke.

Sa biopsijom polarnog tela, ispituje se skup hromozoma majke. Sprovodi se u slučaju da ženska linija otkrije prisustvo genetski determinisane patologije. Postupak vam omogućava da utvrdite da li je jaje zdravo, koje će se koristiti za oplodnju, bez narušavanja njegove strukture. Ako se ne identifikuju anomalije, može se koristiti za oplodnju i prelazak u šupljinu materice.

Postoje slučajevi kada se polarna tela prikazuju, a zatim blastomeri. To vam omogućava da dobijete pouzdaniji rezultat. Šemu po kojoj će se polagati ispit odabire genetičar.

Metode koje se koriste

Numerički i strukturalni poremećaji hromozoma određeni su metodom fluorescentne hibridizacije. Ovaj metod vam omogućava da odredite DNK sekvencu ćelije. Koriste se posebne DNK sonde koje su po svojoj strukturi komplementarne regije za DNK zone blastomera.

Sonda sadrži nukleotid i fluorofor (molekul sposoban za fluorescenciju). Nakon interakcije ciljne DNK sa DNK sondom formiraju se osvijetljene površine, koje se promatraju pod fluorescentnim mikroskopom.

Koristi se i metoda PCR (lančana reakcija polimeraze). Sastoji se od kopiranja dijela DNA pomoću enzima u određenim laboratorijskim uvjetima.

Dijagnoza aneuploidije

Ovo je jedna od metoda predimplantacijske genetske dijagnostike, koja omogućava da se otkrije prisutnost numeričkih kromosomskih abnormalnosti (da bi se odredili dodatni ili nestali hromozomi).

Genetski materijal se sastoji od 46 hromozoma, od kojih polovinu daje otac, a druga polovina majke. Ako embrion dobije dodatni hromozom, to se zove trisomija, a gubitak bilo kakve monosomije. Ovi nedostaci mogu dovesti do sljedećih posljedica:

  • nema implantacije embriona
  • spontani pobačaj,
  • nasljedne patologije (Down sindrom, Klinefelter, Shereshevsky-Turner).

Muška neplodnost i starost bračnog para su česti faktori u razvoju takvih anomalija.

PGD ​​monogene patologije

Pre-implantacijska genetska dijagnostika embrija radi utvrđivanja prisutnosti monogenih bolesti provodi se u obiteljima gdje su utvrđene nasljedne anomalije. Ako par već ima bebu sa homogenom bolešću, onda se mogućnost da ima drugo bolesno dete poveća nekoliko puta.

Razlog je kršenje sekvence hromozoma na određenom delu DNK. Ove bolesti uključuju:

  • cistična fibroza,
  • adrenogenitalni sindrom
  • fenilketonurija,
  • hemofilija
  • anemija srpastih ćelija,
  • Vernig-Hoffmanov sindrom.

Prednosti i rizici metode

Preimplantacijska genetska dijagnostika, čiji se pregledi smatraju nejasnim, ima određene prednosti u oblasti prenatalnog skrininga:

  • Samo visokokvalitetni i zdravi embrioni prenose se u matericu,
  • smanjuje rizik od dobijanja bebe sa genetskim abnormalnostima,
  • dvostruki rizik od pobačaja,
  • udvostručio rizik od višestruke plodnosti,
  • šansa za implantaciju embriona povećava se za 10%,
  • 20% povećanje šanse za uspješno rođenje djeteta.

Rizik od slučajnog oštećenja embriona PGD-om je 1%. Verovatnoća pogrešnog rezultata je 1:10, pored toga, 3% od mogućnosti da će embrion sa bilo kojom anomalijom biti ocenjen kao zdrav.

Vjerovatnoća da će zdravi embrion odstupati od rezultata je 1:10. Mogućnost 1: 5 da će transfer embriona u matericu biti otkazan zbog abnormalnosti koje se nalaze u svakoj od njih.

Kontraindikacije

Pre-implantacijska genetska dijagnostika (PGD), čije posljedice za embrio nisu precizno identificirane, ima brojne kontraindikacije za:

  • fragmentacija embriona više od 30% (formiranje fragmenata do 25% smatra se normalnim),
  • prisustvo višestrukih blastomera u embrionu,
  • embrion ima manje od 6 blastomera trećeg dana svog razvoja.

Bezbednost metode

Dijagnoza se odvija u ranoj fazi stvaranja budućeg organizma, kada su sve njegove ćelije polipotentne, tj. Iz svakog se može formirati punopravni zdravi organizam.

Sve stadije koje su u toku u PGD-u ne izazivaju vrijeme za embrion, fetus i nerođeno dijete. Nakon dobijanja uzorka za ispitivanje, priprema se na poseban način. Ćelije su postavljene na staklenu pločicu na kojoj su fiksirane ili u puferu.

Troškovi postupka

Na prvi pogled, pre-implantacijska genetska dijagnostika, čiji trošak varira od 50 do 120 hiljada rubalja, čini se skupom manipulacijom. Međutim, zdravlje i liječenje djeteta s genetski određenim patologijama koštat će mnogo više.

Procedura daje sve prednosti nad ženama koje mogu da dođu na prirodan način, jer im takva dijagnostička metoda nije dostupna. Pre-implantacijska genetska dijagnostika, čija je cijena oskudna u odnosu na samu in vitro oplodnju, služi samo kao dodatak općem programu, koji omogućava ne samo da se rađa i rađa, već i da se podiže zdravo dijete.

Kako su genetske bolesti nasleđene?

Nije svaka mutacija ili neispravan znak kod roditelja mogu uzrokovati manifestacije bolesti kod djeteta. Sve zavisi od toga da li je dominantna ili recesivna osobina nasleđena od svakog supružnika, i koja kombinacija gena će dete imati.

Ako se gen koji dominira sličnim nepromijenjenim prenosi na dijete, onda postoji rizik od 50% da će se nasljedna patologija manifestirati. Roditelji sa recesivnim genomom bolesti nose bolnu genetsku osobinu. Da bi dijete razvilo kliničke simptome patologije, mora naslijediti dva recesivna gena.

Postoje i bolesti povezane sa seksom. Kod ženki, dvadeset i treći par kromosoma je XX, kod muškaraca, XY. Ako je u genetskom materijalu žene jedan od hromozoma neispravan, onda zbog drugog, razvoj bolesti je blokiran, ali je prisutan nosilac patološkog gena. Kod muškaraca, Y kromosom nije u stanju da blokira efekte patološkog X hromozoma, tako da se bolest manifestira u sinovima takvog para, a kćeri u 50% su nosioci promijenjenog gena.

Preimplantacijska genetska dijagnostika embriona pomaže da se sa 100% tačnošću utvrdi u kojoj je kombinaciji genetski materijal naslijeđen, dijete manifestira bolest, ili će biti nosilac patoloških znakova.

Kome je potrebno sprovesti genetska istraživanja?

Za PGD postoje određene indikacije. Preporučuje se izvođenje studije za žene koje žele da rađaju nakon 34 godine. U ovom uzrastu, čak i sa prirodnom pojavom trudnoće, povećava se rizik od rađanja bebe sa genetskim abnormalnostima.

Oociti postepeno stare, izloženi su različitim negativnim faktorima tokom svog života:

  • loše navike majke (pušenje, pijenje alkohola),
  • hronične bolesti
  • liječenje lijekovima,
  • štetni radni uvjeti (kemijski reagensi, fizički faktori u obliku visokih temperatura, vibracije, ionizirajuće zračenje, elektromagnetska polja),
  • bad ecology.

Sa godinama, neispravna jaja se akumuliraju, što povećava rizik prenosa patoloških gena na potomstvo. Ako se takav embrion prenosi u matericu, onda u većini slučajeva neće se ukorijeniti, trudnoća će biti prekinuta pobačajom. Ili, ako trudnoća napreduje, naknadni pregled će otkriti patologiju koja će postati indikacija za prekid. Preimplantacijska dijagnoza pomaže da se izbjegne psihološka trauma povezana s pobačajom ili rođenjem inferiornog djeteta. Muškarac spada u starosnu grupu rizika stariju od 39 godina. To uključuje supružnike sa patologijom spermatogeneze.

Ženama s uobičajenim pobačajima također se preporučuje PGD. Jedan od roditelja može imati defekt u kromosomima, koji utiče na razvoj embriona i dovodi do pobačaja.

Obavezno proučite parove koji imaju autosomno dominantnu patologiju. Njihova djeca u 50% će biti nosioci gena ili klinički znakovi bolesti.

Takođe sprovodite istraživanje sa:

  • 2 ili više neuspjelih pokušaja IVF-a,
  • 3 ili više pokušaja prenošenja visokokvalitetnih embrija kod žena mlađih od 35 godina, koje nisu završile u trudnoći,
  • rizična grupa za bolesti sa kasnim početkom,
  • želju da dijete bude kompatibilno sa HLA sistemom za dobivanje matičnih ćelija za liječenje drugog djeteta sa ozbiljnom bolešću,
  • rođenje djeteta kompatibilno sa Rh faktorom za sprečavanje sukoba.

Provedena prema indikacijama, PGD pomaže da se izbjegne naknadna prenatalna dijagnoza - amniocenteza, koja smanjuje rizik od pobačaja.

Ciljevi studije

Na osnovu indikacija za dijagnozu, možete definisati njene ciljeve:

  1. Isključivanje embriona sa abnormalnim kariotipom.
  2. Utvrđivanje uzroka neuspjele implantacije tokom prethodnog IVF-a.
  3. Smanjenje rizika od bebe sa anomalijama od roditelja roditelja.
  4. Identifikacija embriona sa predispozicijom za ozbiljne bolesti.
  5. Imati dijete koje je HLA usklađeno za liječenje brata ili sestre.
  6. Smanjenje rizika od hemolitičke bolesti kod rođenja djeteta s određenim Rh faktorom.

Preimplantacijska genetska dijagnostika monogenih bolesti se provodi kako bi se utvrdilo:

  • cistična fibroza,
  • Tay-Sachsova bolest,
  • hemofilija A,
  • Duchenne myodystrophy,
  • anemiju srpastih ćelija.

Potraga za kromosomskim abnormalnostima uključuje proučavanje devet od njih, koji su uzrok sljedećih sindroma:

  • Down (hromozomi trisomije 21),
  • Patau (13. hromozom),
  • Edwards (18),
  • Shereshevsky-Turner,
  • Klinefelter, t
  • "Mačji učenici" (22),
  • hromozomi 15, 16, 17.

Takođe, genetska pretraga vam omogućava da identifikujete mnoge druge bolesti.

Dijagnostičke tehnike

Za PGD se koriste embrioni ili jaja. Ali u prvom slučaju, studija je više informativna embrion ima očev genetski materijal koji može prenijeti neispravne gene.

U studiji se izvodi biopsija jednog blastomera u embrionu od 4-10 posto, koji je u fazi drobljenja. To se događa 3-5 dana. Ne nanosi se šteta budućem fetusu.

Tehnika se može koristiti samo u IVF proceduri, u kombinaciji sa ICSI - veštačko osjemenjivanje spermom. Ovo je učinjeno tako da se u procesu biopsije blastomera, genetski materijal spermatozoida koji nije bio uključen u oplodnju ne uzima za proučavanje.

Daljnji prenos embriona i upravljanje trudnoćom odvija se kao u normalnom IVF-u. Za analizu su dodeljena samo 2 dana, presađivanje treba da se obavi najkasnije 5 dana od razvoja. Više mogućnosti za dijagnozu u ciklusu sa krioprezervacijom. Ako izvršite biopsiju nekih embriona, a zatim ih sačuvate, onda možete sigurno obaviti maksimalno moguće istraživanje, a za sledeći ciklus presaditi visokokvalitetni embrion.

Razvio nekoliko tehnika za PGD.

Koristi se za dijagnostiku numeričkih ili strukturnih hromozomskih promena - aneuploidija i translokacije. Ćelija dobijena biopsijom je fiksirana na klizaču, zagrijana i ohlađena. Kada se to dogodi, ruptura njegove ljuske i oslobađanje citoplazme. Segmenti DNK obeleženi su fluorescentnim sondama - specijalnim bojama. Nadalje, u specijalnom fluorescentnom mikroskopu, možete brojati određene kromosome, identificirati normalne i patološke.

Lančana reakcija polimeraze temelji se na identifikaciji specifičnih DNA kopija. Za početak, on je denaturiran kako bi se odvijala dvostruka nit i dobio jedan fragment. Dodavanjem posebnih enzima, količina genetskog materijala se postepeno udvostručuje. To vam omogućava da otkrijete neispravne lokacije u nukleotidu. Tehnika se koristi za traženje monogenih bolesti, kada se jedan ili dva supružnika definišu kao nosioci defektnih gena ili sa kliničkim znakovima bolesti.

  • Najnovija NGS tehnika

Novina je preimplantacijska genetska dijagnostika u kriociklu metodom NGS, uz pomoć koje se može proučiti svih 23 para kromosoma. Njegova preciznost dostiže 99,9%. Istovremeno, u toku je proučavanje monogenih i hromozomskih patologija, kao i mutacija. Tehnika omogućava razlikovanje uravnoteženih translokacija od normalnog skupa kromosoma. Stoga, nema potrebe da se ponavlja biopsija blastomera. Visoka automatizacija procesa eliminiše dodatne greške.

Koristi i rizici

Upotrebom genetske analize embriona u fazi cijepanja povećavaju se šanse za uspješnu implantaciju. Доказано, что хромосомные изменения у зародышей увеличивают вероятность выкидыша на раннем сроке, формирование неразвивающейся беременности. В 21% случаев самопроизвольного прерывания беременности, в том числе полученной методом ЭКО, причиной прерывания становится хромосомная патология плода. С возрастом количество аномалий увеличивается в геометрической прогрессии.Ako uzmemo u obzir da se žene starije starosne kategorije najčešće pribjegavaju asistiranim reproduktivnim tehnologijama, postaje jasno da dijagnostiku treba obaviti prije presađivanja embrija.

Dobijene informacije lekar može da koristi tokom narednih pokušaja IVF-a, kao i da sugerišu razloge prethodnih neuspešnih pokušaja oplodnje.

Kada se koristi PCR ili fluorescentna metoda, može se ispitati samo određeni broj hromozoma. Stoga se neki nedostaci mogu naslijediti.

Dešava se da je tokom predimplantacijske genetske dijagnoze abnormalni embrion definisan kao normalan. U tom slučaju, naknadna prenatalna dijagnoza će pomoći da se precizno dijagnosticira patologija. U ovoj fazi razvoja nauke PGD nije u mogućnosti da u potpunosti zamijeni ovo drugo. Ponekad se genetske anomalije formiraju mozaikom. U ovom slučaju, biopsija jednog blastomera će potvrditi normalno stanje embriona, a bolest će nastati zbog greške izmenjene ćelije.

Oštećenje embriona tokom biopsije je izuzetno retko, u 0,1% slučajeva. Također treba imati na umu da čak i nakon uspješne dijagnoze i presađivanja normalnog embrija, IVF može propasti iz nepoznatih razloga. U ovom slučaju, uzrok može biti imunološki poremećaj u majčinom tijelu, nedijagnosticirane bolesti. Samo potpuni pregled u smislu pripreme za IVF, zdrav način života povećava šanse da zatrudni.

Sadržaj

Ideja preimplantacijske genetske dijagnoze pojavila se prije rođenja prvog IVF djeteta. Godine 1967. R. Edwards objavio je članak (R. G. Edwards) i R. Gardner (R. L. Gardnero sprovođenju biopsije zečjih embriona za određivanje pola prije implantacije, u kojima su autori predvidjeli pojavu sličnih tehnologija kod ljudi [2]. Međutim, preimplantacijska genetska dijagnostika kod ljudi postala je moguća tek početkom 90-ih, kada je postignut dovoljan tehnološki nivo in vitro oplodnje, te je razvijena lančana reakcija polimeraze, koja je omogućila DNK analizu u pojedinačnim stanicama.

Godine 1989. prvi uspješan pokušaj utvrđivanja spola proveden je PCR analizom blastomera uzetih iz embrija u fazi cijepanja (6-8 blastomera) [3]. Prve uspješne isporuke nakon sličnog postupka kod parova koji su bili izloženi riziku od recesivnog X-vezanog oboljenja dogodile su se 1990. godine.

Godine 1990. dijagnosticirana je monogenska bolest prije oplodnje, a tehnika je uključivala PCR analizu polarnih jajnih stanica [5].

Prvo rođenje djeteta nakon preimplantacijske PCR dijagnoze monogene bolesti (cistične fibroze) dogodilo se 1992. godine [6].

Nakon toga je korištena fluorescentna hibridizacija in situ (FISH) za određivanje pola embrija, kao i kromosomskih abnormalnosti. Počevši od 2012. godine, FISH metoda za određivanje kromosomskih abnormalnosti se postepeno zamjenjuje komparativnom genomskom hibridizacijom. PCR metoda je ostala neophodna za dijagnozu monogenih bolesti.

Preimplantacijska genetska dijagnoza je indicirana za parove koji imaju nosioca kromosomske preraspodjele ili monogene bolesti. Primjeri monogenih bolesti uključuju cističnu fibrozu, Tay-Sachsovu bolest, anemiju srpastih stanica, hemofiliju A, Duchennovu mišićnu distrofiju i mnoge druge.

Pored toga, preimplantacijska genetska dijagnoza se provodi u parova s ​​povećanim rizikom od kongenitalnih anomalija u djece, što nije povezano s prijenosom dijagnosticiranih mutacija. Takvi slučajevi uključuju parove u kojima je starost majke starija od 35 godina, a starost oca je starija od 39 godina, ako otac ima teške poremećaje spermatogeneze, parovi s uobičajenim pobačajima, parovi s ponovljenim neuspješnim pokušajima IVF-a.

U slučaju nedefinisanog povećanog rizika od rađanja bebe sa kongenitalnim anomalijama, predimplantacijska genetska dijagnoza se izvodi za devet hromozoma koji su povezani sa najčešćim urođenim bolestima. To su hromozom 13 (Patau sindrom), kromosom 15 (Prader-Willi sindrom), kromosom 16, hromozom 17, kromosom 18 (Edwardsov sindrom), kromosom 21 (Downov sindrom), kromosom 22 (sindrom "mačkica"), kao i seks t hromozomi X i Y (različite numeričke anomalije, uključujući Shereshevsky-Turner-ov sindrom i Kleinfelterov sindrom).

Preimplantacijska genetska dijagnostika provodi se u nekim slučajevima koji nisu povezani s mogućom genetskom patologijom fetusa, svrha takve dijagnoze je rođenje djeteta s određenim genetskim karakteristikama. Takvi slučajevi uključuju, na primjer, preimplantacijsku genetsku dijagnostiku, koja se provodi kako bi se spriječio rezusni sukob.

Postoje slučajevi kada se kombinuje nekoliko preduvjeta za preimplantacijsku genetsku dijagnozu. Jedan takav primjer je slučaj kada je, koristeći preimplantacijsku genetsku dijagnozu, HLA-kompatibilan donator za staničnu terapiju Fankoni anemije rođen u probandu [7]. U ovom slučaju, isključena je Fanconijeva anemija i odabran je željeni tip histokompatibilnosti.

Izvođenje predimplantacijske dijagnoze moguće je samo u okviru ciklusa IVF tretmana, odnosno, in vitro oplodnje s intraplazmičnom injekcijom spermatozoida (ICSI), tj. Spermatozoid se ubrizgava u jaje "ručno" uz pomoć mikrokirurških instrumenata. ICSI procedura je neophodna zbog činjenice da se u normalnom IVF-u veliki broj sperme dodaje u jajnu ćeliju. Zatim, pri sakupljanju polarnih tijela ili blastomera, postoji rizik da genetski materijal spermatozoida koji nije učestvovao u oplodnji ulazi u analizu sa embrionskom ćelijom.

Priprema za ciklus tretmana i ciklus IVF tretmana sa PGD-om se ne razlikuje mnogo od uobičajenog ciklusa IVF tretmana:

  1. žena prima hormonske lekove za stimulaciju superovulacije,
  2. vrši se punkcija transvaginalnog folikula,
  3. gnojidba jajnih ćelija sa spermom odvija se u laboratoriji za embriologiju,
  4. transfer embriona u matericu traje 5-6 dana.

Ako se genetski poremećaj naslijedi od žene, onda se "zdravi" embriji mogu izabrati prolaskom testa samo polarnim tijelima, bez dodirivanja samog embrija. Takođe možete testirati samo blastomere. Ili se može izvršiti sekvencijalno proučavanje polarnih tela, zatim blastomera.

Koja vrsta PGD šeme će se primijeniti za svaki pojedini slučaj utvrđuje se nakon konsultacija s genetskim liječnikom ili posebno obučenim PGD savjetnikom prilikom planiranja PGD-a.

U prvoj podjeli mejoze, oocita prvog reda je podijeljena, što rezultira formiranjem oocita drugog reda i malog prvog redukcionog tijela (obje stanice s haploidnim skupom kromosoma). U drugoj podjeli mejoze, kao rezultat podjele oocita drugog reda, formiraju se jedna jajna ćelija i drugo redukciono tijelo. Prvo telo za redukciju ponekad se deli na dve identične male ćelije. Kao rezultat ovih transformacija oocita prvog reda, formiraju se jedna jajna ćelija i tri redukciona tela, gde i jajne ćelije i redukciona tela imaju haploidni skup hromozoma. Dakle, moguće je istražiti polarna tela kako bi se utvrdilo da li je jaje nasledilo genetski defekt.

Nakon oplodnje jajašaca spermom u embriološkoj laboratoriji, embrion se razvija - ćelije se dijele. Trećeg dana, embrion se sastoji od 6-8 blastomera. Trećeg dana sakuplja se biološki materijal za genetička istraživanja - takozvana "biopsija embriona", odnosno ekstrakcija jednog blastomera iz embriona (a ponekad i polarnih tela) uz pomoć specijalnih mikrotuba. Procedura ne narušava dalji razvoj embriona. Dok se vrši genetska dijagnostika, embrioni nastavljaju da se razvijaju u odgovarajućem mediju za kulturu dok se ne prebace u matericu 5. dana razvoja. Do tog vremena, embrion mora stići do faze blastociste.

Pre transfera, embriolog procenjuje strukturu i oblik embriona. Rezultat genetske dijagnoze je upoređen sa morfologijom embriona i napravljen je zaključak o tome koji se embrioni preporučuju za prelazak u matericu. Za transfer, embrioni sa najboljim morfološkim karakteristikama se biraju bez genetskih poremećaja.

Analiza se provodi u vrlo kratkom vremenu. Na raspolaganju su samo 2 dana za analizu blastomera, jer embrio ne može nastaviti svoj razvoj izvan majčinog tijela nakon faze blastociste (5. dan nakon oplodnje), stoga se studija mora izvesti u ovom kratkom vremenu.

Alternativni pristup je izvođenje PGD-a u kriociklu. U ovom slučaju, biopsija se izvodi na 5. dan razvoja, a odmah nakon toga embrioni se podvrgavaju krioprezervaciji. U narednom mesecu se vrši genetska dijagnostika i preporučeni embrioni bez mutacija prenose se u matericu tokom sledećeg ciklusa. Praksa nepovezanog ciklusa ima nekoliko prednosti: manji rizik od prekomjerne stimulacije, više materijala i vremena za analizu, manje traumatične procedure za biopsiju embriona. Nedostatak kriocikla je duži period od početka stimulacije do transfera embrija [1].

  1. Za numeričke i strukturne hromozomske abnormalnosti koristi se FISH (fluorescentna hibridizacija) in situ). Obično se vrši za analizu numeričkih poremećaja tri, pet ili sedam hromozoma, najčešće hromozoma 13, 18, 21, X i Y.
  2. Moderna alternativa FISH metodi je komparativna genomska hibridizacija na mikročipovima (GHS). GHS vam omogućava da testirate sve hromozome u isto vreme.
  3. Kod izvođenja PGD monogenih bolesti koristi se PCR metoda.

Metoda fluorescentne hibridizacije in situ (FISH) je metoda citogenetske analize koja se koristi za identifikaciju i lokalizaciju specifičnih sekvenci DNK na metafaznim hromozomima i interfaznim jezgrama. Ovaj metod koristi DNK sonde, koje su nukleotidna sekvenca ograničene veličine koja je komplementarna specifičnoj regiji nuklearne DNK. Sonda nosi "oznaku", tj. Sadrži nukleotide povezane sa fluoroforom (molekul sposoban za fluorescenciju). Nakon postupka hibridizacije u slučaju formiranja hibridne molekule DNK probe i ciljne DNK na citogenetskom preparatu koji se istražuje, luminiscencija specifičnih DNK sekvenci na hromozomima ili jezgrama može se posmatrati pomoću fluorescentnog mikroskopa.

Lančana reakcija polimeraze je metoda zasnovana na višestrukom selektivnom kopiranju određenog dijela DNA pomoću enzima u umjetnim uvjetima (in vitro). Kada se to dogodi, kopira se samo područje koje zadovoljava specificirane uslove, i samo ako je prisutno u uzorku koji se ispituje.

Loading...